在茶园中,由于长期种植茶树和套种其他植物,形成了独特的土壤微生物群落,其中,固氮微生物是十分重要的特殊功能群之一,在氮素循环中发挥着不可替代的作用,其多样性直接影响着氮循环进程及固氮资源的利用。目前,人们对套种茶园的研究主要集中在节肢动物群落、茶树生长和茶叶产量品质等方面,对套种茶园土壤固氮微生物多样性变化的研究还鲜见报道。本文研究了套种圆叶决明和施用化肥处理对茶园土壤固氮微生物多样性的影响,其主要结果如下:（1）茶园土壤中的各类微生物数量在一年中有两个高峰期,从2月份开始,各类微生物数量逐渐上升,在6月份达到第一个高峰期,8月份各类微生物数量有所下降,然后各类微生物数量又开始上升,在10月份达到第二个高峰期,此后各类微生物数量逐渐下降,在次年2月份出现最低值。从茶园土壤微生物的组成来看,细菌、真菌、放线菌和固氮菌的组成比列大体一致,数量上以细菌为主,放线菌次之,固氮菌居第三,真菌最少,且0²0 cm土层各类微生物数量均显著大于20⁴0 cm土层;与CK相比,套种圆叶决明和施用化肥处理均能显著提高各土层中的细菌数量和微生物总数;施用化肥处理能够显著提高各土层中的真菌数量同时能够显著降低放线菌数量和固氮菌数量;套种圆叶决明能够显著降低各土层中的真菌数量同时能够显著提高放线菌数量和固氮菌数量。（2）获得高质量、大片段、无偏好的土壤微生物总DNA是茶园土壤微生物分子生态学研究的基础。本文比较了5种土壤微生物DNA提取方法:SDS高盐法、变性剂加SDS高盐法、脱腐SDS高盐法、CTAB法和Krsek改进法。结果表明Krsek改进法是一种高效、可靠且适合于茶园土壤微生物分子生态学研究的DNA提取方法,该方法提取到的DNA片段>23 kb,纯度OD260/OD280>1.70、OD260/OD230>1.35,产量>34.50μg·g^-1 dry soil,且不需纯化就可以用于后续的分子生态学研究。（3）各处理在0²0 cm土层nifH基因的OTU种类、H’、D和dMa均大于20⁴0 cm土层;与CK相比,套种圆叶决明能够提高各土层nifH基因的OTU种类、H’、D和dMa,而施肥处理对各土层nifH基因的OTU种类、H’、D和dMa影响不大。对23个nifH基因克隆进行测序,测得的序列与GenBank数据库中已发表的序列的相似性介于85%⁹8%之间,且有91.3%的克隆序列与环境中未培养细菌的同源性最高,这些序列所代表的固氮微生物在α-、β-、γ-变形菌门及蓝细菌门均有分布,所占比例分别为69.6%、8.7%、13%和8.7%,这表明茶园土壤固氮微生物具有丰富的多样性。