鹅浆膜炎病原调查及其免疫、微量凝集试验方法的研究

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鹅浆膜炎是指由鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的以纤维蛋白渗出并在脏器表面沉积,胸、腹腔大量积液为特征的疫病,2-8周龄鹅多发,发病率90%,死亡率10%-40%,给养鹅业造成很大经济损失。Riemer于1904年首次报道鹅渗出性败血病,病原命名为败血性巴氏杆菌(Pasteurella septicaemia)。后来认识到该菌与鸭浆膜炎的病原同类,为纪念Riemer氏的发现命名为鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)。RA分为21个血清型,型之间无交叉免疫保护。RA对庆大、卡那、沙星类抗生素等敏感。鹅、鸭养殖中广泛使用抗生素防治本病,但耐药性和药残问题突出。近年,重庆市大力发展种草养鹅事业,荣昌、永川等地鹅浆膜炎流行严重,急需综合防制技术。为此,我们进行了研究,取得如下成果。1、确诊了我市流行的鹅浆膜炎。该病发生于10-50日龄小鹅,缩颈,脚软,不愿走动,呼吸有杂音,拉稀,粪便为黄白色。典型病变有纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎。发病率40%左右,用抗菌素防治后,死亡率控制在18%以内。采取巧克力平板从6次发病中均分离到细菌,其中编号为XJY1、YC3和XJY2的3株细菌系统鉴定为RA,对庆大霉素和新霉素高度敏感,2株对头孢三嗪、头孢唑啉、卡那霉素高度敏感。12日龄荣昌白鹅本动物回归试验,攻毒剂量为5×10~9CPU/只,观察7天,XJY1和XJY2发病率为80%(4/5)和100%(5/5),死亡率为60%(1/5)和80%(4/5)。2、同圈感染试验证明,鸭浆膜炎可以传染给鹅。10日龄健康鸭皮下接种鸭RA强毒AF株菌液(8×10~9CPU/m1)0.4ml后,与10日龄健康小鹅同圈饲养7天。结果是,攻毒鸭死亡率为55%(4/8),存活鸭全部(4/4)扑杀后均有鸭浆膜炎典型病变。同圈饲养的8只小鹅于鸭攻毒后的次日发病,第3天出现死亡,死亡率为75%(6/8),存活的2只鹅扑杀后有心包炎和肝周炎。AF株菌液直接注射组小鹅,注射当天即发生死亡,死亡率高达100%。注射生理盐水对照组鸭鹅各6只均健康成活。扑杀后未见到脏器异常。3、鹅RA对小鸭有致病力。XJY1株和XJY2株菌液(8×10~9CPU/mL)0.7mL颈部皮下接种12日龄花边鸭,观察8天。XJY1组先表现不食,48小时后恢复吃饲,但较健康对照组减饲30%以上。5只实验鸭中出现临床症状的2只(占40%),死亡0,扑杀后观察,4只有心包炎和肝周炎病变,发病率应为80%。XJY2组出现临床症状者60%(3/5),死亡40%(2/5),活下来的3只鸭扑杀后2只有心包炎和肝周炎病变,发病率也应为80%((4/5)。4.建立的微量凝集试验(Microagglutination test,MAT)方法检测鹅血清中RA抗体特异、快速、敏感、成本低。MAT抗原为灭活的RA菌体抗原,浓度以A600为0.7为优。V型微孔板中,反应体积为100μL,5μL血清用95μL PS稀释后进行倍比稀释,加入50μL抗原,37℃反应2小时后4℃过夜。阴性孔中央有白色沉淀点,当板垂直树立时,沉淀点向下滑成线状;阳性孔中无沉淀点,板垂直树立时无下滑线现象。应用MAT鉴定,XJY1株与XJY2株为同一血清型,YC3株为另一个血清型。试验中体会到,MAT结果易于观察与判定,因而重复性好。一块板上可以检测10份血清,便于大量样品筛查,净化疫病用。5.XJY1油乳剂抗原免疫鹅MAT抗体效价随接种日龄增加而增加,但6日龄组未出现阳性结果。XJY1株(8×10~9CPU/ml)免疫30日龄荣昌白鹅后,RA抗体于免疫后7天出现阳性,10天全部阳转,14天效价达到高峰(7log2以上),以后下降到次高效价(6log2),维持至35天后下降,42天时全部转阴。6、16、22、30和50日龄荣昌白鹅用该抗原免疫14天后的平均抗体效价分别为0(即无阳性)、4.33log2、7.3log2、9.7log2和7.3log2。6.MAT抗体效价与免疫保护相关,但不是直线相关。鸭RA AF株油乳剂抗原免疫30日龄荣昌白鹅,14天后获得MAT效价为1:80和1:160的2份鹅血清进行攻毒后的被动免疫保护试验,即14日龄花边鸭皮下攻毒AF菌液(8×10~9CPU/ml)1mL,30分钟后注射鹅血清,观察7天。结果是:健康对照组生长发育完全正常,100%(8/8)健活,攻毒对照组发病率和死亡率均为100%(8/8),效价为1:80鹅血清注射0.25、0.5和1ml组存活率分别为0(0/8)、12.5%(1/8)和62.5%(5/8);效价为1:160鹅血清注射1ml和2ml组存活率为0(0/8)和50%(4/8)。
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