研究背景:前列腺癌目前是全世界范围内男性发病率第二高的恶性肿瘤,高居男性癌症死因第五位。尽管前列腺癌的诊断手段和治疗方法较前已经有了很大的进步,但中晚期前列腺癌以及去势抵抗型前列腺癌依然是导致前列腺癌患者死亡的重要原因。他汀类药物是一种羟甲基戊二酰辅酶A的竞争性抑制剂,可以抑制人体内胆固醇的从头合成,自从发现之后很快便成为降低血浆胆固醇的重要药物,特别是在人工合成成功之后,他汀类药物很快便成为全世界使用最广泛的降低胆固醇水平的药物,其中以阿托伐他汀最具有代表性。在流行病学观察中,有研究人员发现,他汀类药物可以延长部分前列腺癌患者的生存期,但是这其中的作用机制,尚未研究明确。Lnc RNA是一类非编码RNA,是指由基因组转录的长度大于200nt且不能作为翻译蛋白质模板的一类RNA,目前研究较多的lnc RNA作用机制是其充当ce RNA去竞争性抑制mi RNA与m RNA的相互作用,进而起到调控m RNA的作用。在肿瘤的发生和发展中,lnc RNA也起着十分关键的作用。在lnc RNA与恶性肿瘤相关的研究中,它们可以作为潜在的肿瘤治疗的靶点、预后判断的依据以及早期诊断的肿瘤标记物。研究目的:本研究以阿托伐他汀对前列腺癌PC-3细胞系的作用为切入点,验证阿托伐他汀在体内外对前列腺癌的抑制作用,并且进一步寻找阿托伐他汀作用PC-3细胞的lnc RNA表达差异,并验证其作用效果,进而探究阿托伐他汀对前列腺癌的抑制效果的作用的机制。实验方法:1)通过CCK-8和克隆形成实验观察阿托伐他汀对PC-3细胞的增殖抑制效应。2)通过流式细胞学检测及Western blot检测细胞凋亡关键蛋白含量验证阿托伐他汀可诱导PC-3细胞凋亡。3)通过划痕实验和Transwell实验验证阿托伐他汀抑制PC-3细胞的迁移和侵袭能力。4)使用Western blot检测E-cadherin、Ncadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9等关键蛋白含量验证阿托伐他汀可抑制PC-3细胞的EMT过程。5)通过裸鼠皮下成瘤实验验证阿托伐他汀在体内有抑制前列腺癌生长的作用。6)使用高通量测序方法找出阿托伐他汀处理前后PC-3细胞中差异表达的lnc RNA,并使用生物信息学数据库筛选出作用目的基因。7)使用si RNA转染降低PC-3细胞中目标lnc RNA的表达,并通过CCK-8,克隆形成、流式细胞学和Transwell实验观察其生物学行为变化。8)通过q PCR和Western blot验证lnc RNA目标基因和其蛋白在PC-3细胞中的表达。结果:1)CCK-8和克隆形成实验可见阿托伐他汀可以抑制PC-3细胞的体外增殖,并且这种效果存在剂量依赖性。2)流式细胞学及Hoechst 33342染色结果显示阿托伐他汀可以促进PC-3细胞的凋亡,阿托伐他汀浓度越高,促凋亡效果越显著。3)细胞划痕实验及Transwell实验可见阿托伐他汀在体外可以抑制PC-3细胞的迁移和侵袭能力。4)阿托伐他汀可以降低PC-3细胞中MMP-2和MMP-9的含量,从而抑制PC-3细胞的EMT。5)裸鼠皮下成瘤实验中,可见阿托伐他汀可以在体内抑制PC-3细胞的增殖和迁移。6)高通量测序筛选阿托伐他汀作用前后的PC-3细胞株差异表达lnc RNA为SNHG4。7)我们使用生物信息学数据库筛选出SNHG4/mi R-206/E2F5通路作为后续实验的验证目标通路。8)干扰SNHG4表达后mi R-206的表达量显著提高,同时E2F5的表达量显著下降,PC-3细胞中的E2F5蛋白含量显著下降,在加入阿托伐他汀后效果更加显著。9)抑制SNHG4表达后,PC-3细胞的增殖受明显抑制,在此基础上加入阿托伐他汀抑制效果更加显著。10)抑制SNHG4表达后,PC-3细胞凋亡数量明显增加,同时加入阿托伐他汀后,肿瘤细胞凋亡现象更加明显。11)在抑制了SNHG4表达后,PC-3细胞的迁移和侵袭能力都有了明显的下降,而在加入阿托伐他汀后,抑制效果更加显著。结论:1.阿托伐他汀在体外和体内试验中可以抑制前列腺癌PC-3细胞株的增殖、迁移和侵袭能力,并可促进癌细胞凋亡。2.阿托伐他汀通过调节MMP-2和MMP-9的表达来影响癌细胞的EMT进而影响前列腺癌细胞的迁移和侵袭。3.阿托伐他汀抑制可以PC-3细胞中SNHG4的表达,而SNHG4通过竞争性抑制mi R-206的表达来影响mi R-206的靶基因E2F5的表达。4.阿托伐他汀可以通过SNHG4/mi R-206/E2F5互作轴起到抑制PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭。