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研究背景与目的滤泡辅助T细胞(follicular helper T cells,TFH)是CD4+辅助T细胞的一个特殊亚群,它在生发中心反应（germinar center,GC）的建立,GC B细胞通过高亲和力抗原受体的选择,选择性分化为记忆B细胞和长寿命浆细胞的过程中起到了关键的作用。TFH细胞分化是一个多阶段、多因子参与的过程[1],包含了Bcl6和其他一些转录因子,其中Bcl6在TFH细胞分化过程中起到了决定性的作用[2]。此外TCF-1、IRF4、Batf、Ascl2和STATs都参与到了TFH细胞的分化调控[1]。FGL2,纤维蛋白原样2凝血酶原酶,又称纤维介素（Fibroleukin）。分为膜相关蛋白（mFGL2）和分泌蛋白（sFGL2）两型。mFGL2能够将凝血素转变为凝血酶。sFGL2可抑制HBV病人CD8+T细胞的增生和功能[3]。同时,它还维持了TReg细胞的活性,体外实验中抑制了T细胞增生[4]。然而FGL2在体内对于T细胞免疫应答的影响还未见报道。T细胞因子1（TCF-1,Tcf7基因编码）和淋巴增强结合因子1（LEF-1,Lef1基因编码）是经典Wnt通路的下游效应转录因子,在胸腺细胞发育、T细胞分化和记忆CD8+T的维持上起到重要作用[5,6]。LEF-1和TCF-1在CD4+CD8+双阳阶段,决定了胸腺细胞向CD4+T或者CD8+T方向分化[7,8]。在成熟的CD8+T细胞,TCF-1在记忆CD8+T细胞的维持中发挥了重要的作用,并协同LEF-1调控了记忆前体细胞的形成和记忆CD8+T细胞的再次应答能力[9-11]。在成熟的CD4+T细胞,TCF-1通过上调GATA-3的表达促进了TH2细胞的分化[12]。TCF-1的表达在发育的胸腺细胞和活化的CD4+T细胞中限制了IL-17A的表达[13]。在淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒（LCMV）急性感染模型中,TCF-1通过调控Bcl6-Blimp1轴启动了TFH细胞的分化[15]。然而,TCF-1和LEF-1在蛋白免疫过程中对于TFH细胞的分化和功能的影响也未见报道。因此,本课题重点研究在小鼠体内实验中FGL2对T细胞免疫应答的影响以及在蛋白免疫过程中TCF-1和LEF-1对TFH细胞分化和功能的作用。本研究的主要内容:1.FGL2在急性病毒感染过程中对T细胞免疫应答的影响我们首先检测了LCMV感染后,血浆中FGL2的变化情况。结果显示LCMV Armstrong急性感染后第3、5和8天,小鼠血浆中的FGL2浓度分别上调了65%、111%、151%。为了验证FGL2的上调是否对T细胞的免疫应答产生影响,我们用LCMV感染Fgl2基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠,第8天检测T细胞的增殖、分化和功能。我们还过继转移SMARTA小鼠细胞（具有特异性识别LCMV GP66-77表位的TCR的CD4+T细胞）和P14小鼠细胞（具有特异性识别LCMV GP33-41表位的TCR的CD8+T细胞）到Fgl2基因敲除小鼠和C57BL/6J小鼠体内,检测了FGL2作为外源性影响因素对T细胞增殖、分化和功能的影响。结果显示:实验组和对照组TFH细胞、TH1细胞和效应CD8+T细胞的频率和数量均无明显差异（p>0.05）。结论提示了在体内实验中,虽然FGL2在急性病毒感染模型中表达上调,但FGL2不影响T细胞的免疫应答。2.TCF-1和LEF-1在蛋白免疫过程中协同调控TFH细胞的功能我们用NP-CGG或融合LCMV GP66-77表位的GST蛋白（GST-GP66-77）与弗氏佐剂混合,分别免疫已经被Tamoxifen诱导敲除的Lef1fl/+Tcf7fl/+（Ctrl）、Lef1-/-Tcf7-/-（DKO）、Lef1-/-Tcf7fl/+（LKO）和Lef1fl/+Tcf7-/-（TKO）小鼠。免疫后第8天,检测小鼠腹股沟淋巴结中TFH细胞的频率和GC B细胞的频率。结果显示:在NP-CGG蛋白免疫条件下,和Ctrl组相比,DKO、LKO和TKO组的TFH细胞的频率均无明显变化（p>0.05）。TKO组的GC B细胞的频率下降了约40%,DKO组下降了约80%（p<0.001）。我们认为,GC B细胞频率的降低可能有两种原因:1、B细胞中的TCF-1和LEF-1同时也被Tamoxifen诱导敲除了,从而导致GC B细胞频率的降低;2、TCF-1和LEF-1在蛋白免疫过程中协同调控了TFH细胞的功能,从而影响了GC B细胞的分化。下一步,我们将利用过继转移SMARTA细胞或B1-8Hi细胞（特异性识别NP表位的B细胞）以及体外共培养实验来研究GC B细胞频率下降的原因并探求TCF-1和LEF-1在其中发挥功能的分子机制。总结:我们证实了在LCMV感染后,血浆中FGL2的表达上调,但这种上调在体内实验中不影响T细胞的免疫应答。在NP-CGG蛋白免疫模型中,和Ctrl组相比,DKO、LKO和TKO组的TFH细胞的频率均无明显变化,而TKO组的GC B细胞的频率下降了约40%,DKO组下降了约80%。这种降低是因为TCF-1和LEF-1协同调控了TFH细胞的功能,还是B细胞的分化,以及TCF-1和LEF-1在其中发挥功能的分子机制还有待进一步研究。