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迄今为止，关于日粮粗/精比例对瓣胃上皮生长的影响及其机理尚未见报道。本文以青年杂交山羊为研究对象，探讨不同粗/精比例日粮对瓣胃上皮生长的影响及细胞和分子生物学机理。
一日粮粗/精比例对山羊瓣胃上皮生长的影响为研究日粮粗/精比例对瓣胃上皮生长的影响，26只青年波杂山羊(120d，BW14.27±0.69 kg)随机分成:全粗料组(粗/精比为100∶0，PS，n=13)和粗料加精料组(粗/精比为60∶40，PSC，n=13)，实验期(42天)结束后，屠宰所有山羊，器官称重，采集瓣胃上皮。组织切片技术观察瓣胃上皮形态;生化分析技术测定上皮总蛋白、DNA和RNA含量;流式细胞仪测定细胞周期;实时定量RT-PCR测定细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞周期依赖性激酶4(CDK4) mRNA表达;Western blot方法测定cyclin D1和CDK4蛋白表达。结果显示:(1)PS组瓣胃器官相对重量(瓣胃器官重/胴体重，P＜0.05)和瓣胃上皮相对重量（瓣胃上皮重/胴体重）显著高于PSC组(P＜0.05），表明全粗料(粗/精比为100∶0)日粮加快瓣胃上皮生长。(2) PS组瓣胃上皮基底层细胞数量显著增多(P＜0.05)，棘突层和颗粒层细胞数量和细胞层数显著增多(P＜0.05）;同时PS组瓣胃上皮DNA含量显著升高(P＜0.05)，相反Pro∶DNA比值显著降低（P＜0.05）;表明全粗料(粗/精比为100∶0)日粮加快瓣胃上皮生长与细胞数量性增多相关。(3)流式细胞术分析表明，PS组细胞周期进程加快，表现为S期(DNA合成期)(P＜0.05）和G2/M期（有丝分裂期）细胞数量显著升高(P＜0.05），而G0/G1(DNA合成前期)期的细胞数量显著降低(P＜0.05)，提示全粗料(粗/精比为100∶0)日粮促进瓣胃上皮细胞增殖。PS组G1期cyclinD1和CDK4 mRNA(P＜0.05)和蛋白(P＜0.05)表达水平显著高于PSC组，提供了PS组cyclin D1-CDK4表达增加、推动G1期细胞向S期跃迁、引起细胞周期加快、促进瓣胃上皮细胞增殖的证据。综上表明，全粗料(粗/精比为100∶0)日粮通过提高cyclin D1表达，加快细胞周期G1期进程，促进瓣胃上皮增殖，引起瓣胃上皮生长加快。
二全粗料日粮促进山羊瓣胃上皮生长的机理研究为研究全粗料日粮促进山羊瓣胃上皮生长的机理，采用体内研究和体外研究。
1、体内研究:动物试验及样品采集同系列一。采用Elisa方法测定表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)浓度;实时定量RT-PCR测定表皮生长因子受体(epidermal growth factor, EGFR); Western blot方法测定ERK、pERK、AKT和pAKT蛋白表达。结果显示:(1)PS组血清EGF浓度(P＜0.05）显著增加;瓣胃上皮EGFRmRNA(P＜0.05)表达水平显著升高，提示全粗料(粗/精比为100∶0)日粮加速细胞周期进程可能与EGF及其受体途径有关。(2) PS组ERK1/2、pERK1/2蛋白均显著升高(P＜0.05)，表明全粗料(粗/精比为100∶0)日粮显著提高pERK1/2的水平，提示全粗料(粗/精比为100∶0)日粮促进瓣胃上皮细胞增殖可能与Ras/Raf/MEK/ERK信号通路有关。(2)PS组AKT蛋白显著升高(P＜0.05），而两组间pAKT蛋白没有变化(P＞0.05），表明全粗料(粗/精比为100∶0)日粮虽显著提高总AKT表达，但并不能提高pAKT水平，提示全粗料(粗/精比为100∶0)日粮促进瓣胃上皮细胞增殖可能与PI3K/AKT信号通路关系不大。
2、体外研究:体外试验选4只健康青年波杂山羊，屠宰采样分离瓣胃上皮，酶消化获得单个细胞后进行原代培养，24 h细胞附着后，EGF、EGFR抑制剂、ERK抑制剂或AKT抑制剂等进行处理，8或24 h后分别收集细胞，保存待测。3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成能力;实时定量RT-PCR测定cyclin D1和CDK4 mRNA表达;Western blot方法测定cyclin D1、CDK4、ERK、pERK、AKT和pAKT蛋白表达。结果显示:(1)不同浓度的EGF(30、60和120 ng/ml)均促进体外瓣胃上皮细胞3H-TdR掺入率(P＜0.05)，促进DNA合成，表明EGF具有促进瓣胃上皮细胞增殖的能力;而EGFR特异性抑制剂(AG1478)可阻断EGF(60 ng/ml)对体外瓣胃上皮细胞3H-Tdr掺入率的促进作用(P＜0.05)，提示EGF的促瓣胃上皮细胞DNA合成必须通过与其受体结合来实现。(2) EGF显著促进体外瓣胃上皮细胞G1期cyclin D1 mRNA(P＜0.05)和蛋白(P＜0.05)的表达，以及CDK4 mRNA(P＜0.05)的表达，而对CDK4蛋白的表达没有显著影响(P＞0.05)。采用EGFR抑制剂则EGF对体外瓣胃上皮细胞cyclin D1蛋白表达的促进作用被抑制(P＜0.05），表明EGF促进瓣胃上皮细胞增殖主要通过提高cyclinD1的表达，增加cyclin D1-CDK4复合物而推动G1期细胞向S期跃迁。综合体内研究结果证明全粗料(粗/精比为100∶0)日粮促进瓣胃上皮增殖与血清EGF浓度增加有关。(3) EGF处理体外瓣胃上皮细胞30 min时，pERK/ERK显著升高(P＜0.05)，表明体外EGF促进瓣胃上皮ERK1/2磷酸化，提高pERK的水平;采用ERK抑制剂则EGF诱导的cyclin D1蛋白表达增加(P＜0.05）被部分抑制;EGF(P＞0.05)和ERK抑制剂(P＞0.05）对CDK4蛋白表达均无显著影响。结果表明EGF促进体外瓣胃上皮细胞增殖和增加cyclinD1蛋白表达部分经由EGF受体后Ras/Raf/MEK/ERK信号通路介导。4）EGF处理体外瓣胃上皮细胞30 min后，pAKT/AKT显著升高(P＜0.05），表明体外EGF促进瓣胃上皮AKT磷酸化，提高pAKT的水平;AKT抑制剂部分抑制EGF诱导的cyclin D1蛋白表达增加（P＜0.05）;而CDK4蛋白在处理前后没有显著变化(P＞0.05）。结果表明EGF提高体外瓣胃上皮cyclinD1蛋白表达部分经由EGF受体后PI3K/AKT信号通路介导。综合体内外研究结果表明全粗料（粗/精比为100∶0）日粮促进瓣胃上皮细胞的增殖经由EGF及其受体后Ras/Raf/MEK/ERK信号通路介导，而PI3K/AKT信号通路有待进一步研究。
综上所述，全粗料(粗/精比为100∶0)日粮通过提高瓣胃上皮cyclin D1表达，加快G0/G1期细胞向S期跃迁，促进细胞增殖，最终引起瓣胃上皮的生长。这一过程主要经由EGF及其受体后Ras/Raf/MEK/ERK信号通路介导。