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第一部分糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞保护作用的应用研究目的:糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)的常见眼部并发症之一,同时也是致盲的主要因素。本研究在建立实验性糖尿病大鼠模型的基础上,观察糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞形态学结构的影响,对小胶质细胞标记物CD68和胶质源性神经营养因子(glial cell line derived neurotropic factor, GDNF)表达的影响,探讨糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用。方法:选用SPF级SD雄性六周龄大鼠24只,对除6只正常组外的其它大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotoein, STZ) (60mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,正常组大鼠经腹腔注射等体积生理盐水。72小时后取大鼠尾尖静脉血测血糖,连续3天血糖≧16.7mmol/L者则为造模成功。造模成功后随即将糖尿病大鼠分为模型组6只、治疗组6只、对照组6只。治疗组和对照组在造模成功后即开始进行干预,给药时间为每天上午8-10时,给药方式为灌胃。治疗组(炙黄芪、红参、丹参、三七粉、茯苓、桂枝、地龙等经水煎浓缩,浓度为1g/mg),给药量为10g/(kg·d);对照组(多贝斯)给药量为250mg/(kg·d)。每天观察大鼠的毛色、形态及尿量,每2周测大鼠血糖、体重。经过9个月的实验周期后,用10%水合氯醛过量麻醉以处死大鼠,摘取眼球,制备视网膜切片,通过光学显微镜和电子显微镜观察大鼠视网膜形态结构的改变;运用免疫组织化学染色法(Envision法)检测CD68和GDNF在视网膜上的表达,通过图像分析软件测量免疫组化显色的光密度值并进行定量分析。结果:(1)血糖:造模前大鼠血糖无明显差异(P>0.05);造模成功后,糖尿病大鼠的血糖在各个时间点与正常组相比明显升高(P<0.05)。(2)体重:造模前大鼠体重无明显差异(P>0.05);造模后第6周,糖尿病大鼠的体重在各个时间点与正常组相比明显减轻(P<0.05)。(3)视网膜形态学观察:光镜下:与正常组相比,模型组大鼠视网膜各层排列紊乱,神经纤维层增厚、水肿;神经节细胞数量减少,细胞核固缩,染色质边集现象明显,可见部分神经节细胞坏死、核溶解;内丛状层水肿明显;内核层胞体排列紊乱、疏松,空泡样变性;外核层胞体排列紊乱、疏松;感光细胞呈丝状排列,尚整齐,可见空泡样改变;治疗组与模型组和对照组相比,视网膜各层排列明显整齐,神经纤维层水肿不明显,神经节细胞见部分核固缩,偶见空泡样改变,内丛状层排列完整、紧密,感光细胞外节见少量空泡样改变明显减轻。电镜下:与正常组大鼠相比,模型组大鼠视网膜神经节细胞间隙增大,细胞核浓缩明显,染色质见边集现象,细胞间可见增生活化的小胶质细胞包绕;外核层排列紊乱、疏松,核膜皱缩、内陷,可见染色质边集,核间可见小胶质细胞;光感受器细胞外节膜盘排列紊乱、疏松变形,并发生断裂、溶解,线粒体肿胀,空泡化明显。治疗组与模型组和对照组相比,大鼠视网膜神经节细胞间隙增大,排列尚整齐,可见核浓缩,染色质边集,可见散在分布的小胶质细胞;外核层排列整齐而紧密,细胞核电子密度均匀;光感受器细胞外节膜盘排列整齐,局部可见疏松,未见明显线粒体肿胀及空泡样改变。(4)CD68在视网膜的表达结果:与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜CD68阳性表达明显增加(P<0.05);与模型组相比,治疗组、对照组表达明显增高(P<0.05);与对照相比,治疗组表达无明显差异(P>0.05)。(5) GDNF在视网膜上的表达结果,与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜GDNF表达值明显增高(P<0.05);与模型组相比,治疗组、对照组表达量明显增加(P<0.05)结论:1实验性糖尿病大鼠的视网膜发生明显的病理性损害;2糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞具有一定的保护作用;3糖网1号方能抑制糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞的活化,增强GDNF的表达,有助于减轻视网膜神经细胞的损害,促进细胞的修复与再生。第二部分针刺对外伤压迫性视神经萎缩的临床观察目的:观察针刺对外伤压迫性视神经萎缩(optic atrophy, OA)的临床疗效。方法:对45例(68眼)外伤压迫性视神经萎缩患者,与针刺治疗,观察患者治疗前与治疗后1个月、3个月、6个月的视力、视野以及治疗前与治疗6个月后的视觉诱发电位(visual evoked potential, VEP)的变化。结果:(1)视力:治疗1个月、3个月、6个月后视力与治疗前相比,均有不同程度的提高,其有效率分别为32.35%、48.43%、61.29%;(2)视野平均光敏感度(mean light sensitivity, MS)、视野平均缺损值(mean defect, MD):与治疗前相比,治疗1个月、3个月和6个月的MS均明显升高、MD值均明显增高(P<0.05); (3) VEP潜伏期和振幅:与治疗前相比,治疗6个月VEP-P100波的潜伏期明显缩短(P<0.05),振幅明显升高(P<0.05)。结论:针刺治疗外伤压迫性视神经萎缩疗效确切,能有效改善该病患者的视力、视野、视觉诱发电位,防止视神经损害继续加重,提高患者视功能质量及生存治疗。