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随着工业化的发展、城市化进程的深入,我国的环境污染不断加剧。土壤环境污染物种类和数量在不断增加,严重损害经济发展和人体健康。目前,土壤污染修复主要有物理/化学修复和生物修复两大类。植物修复是指为利用绿色植物去除环境中的污染物。与传统修复技术相比,植物修复技术因具有更加快速、高效、费用低、便于推广等优点,近年来呈现出良好的发展前景。本研究旨在利用基因工程技术将两个基因转入紫花苜蓿中以提高其对土壤重金属和有机物复合污染的修复能力;谷胱甘肽转移酶基因GST和细胞色素氧化酶基因CYP2E1是两种分别与重金属和有机物抗性、积累相关的基因。目前,国内外尚未出现同时利用这两个基因进行土壤修复的报道。本实验构建含有CYP2E1基因的植物表达载体:用目的基因替换表达载体pBI121上的Gus基因,构建P35S-CYP2E1-T35S表达盒,即质粒pBI121-CYP2E1。然后通过冻融法将表达载体pBI121-CYP2E1转入含目的基因GST的农杆菌LBA4404中。本实验选取“阿尔冈金”紫花苜蓿的下胚轴作为基因转化受体,通过组织培养研究,筛选并优化出胚性愈伤组织的诱导分化条件,构建并优化出适合“阿尔冈金”的遗传转化再生体系。经共转化将GST基因和CYP2E1基因导入“阿尔冈金”紫花苜蓿中。经共培养、选择培养最终获得了240株抗卡那霉素的转基因植株。筛选出的240株抗性植株应用PCR和RT-PCR进行分子学水平检测后,对其转基因植株的抗重金属和有机物功能进行了鉴定。结果表明所获得的抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基因GST和CYP2E1并有效表达。