Dicer在肾透明细胞癌中的表达及其功能学研究

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目的:大量研究证实microRNA(miRNA)合成过程的失调与肿瘤的发生发展有关,然而这一过程在肾透明细胞癌中的作用还未见报道。本实验旨在研究miRNA合成过程中的关键酶Dicer在肾透明细胞癌中的表达及其生物学作用,探讨Dicer与肾透明细胞癌发生及转移的关系。方法:选取正常肾小管上皮细胞系HKC、非转移性肾透明细胞癌细胞系786-O、转移性肾透明细胞癌细胞系ACHN以及42例肾透明细胞癌手术标本(其中14例已发生远处转移)和相应癌旁正常肾组织,应用实时定量PCR和Western blot法检测Dicer在肾透明细胞癌细胞株和组织中mRNA和蛋白水平的表达,同时应用免疫组织化学染色法检测Dicer在组织中的表达。应用脂质体介导法转染DicersiRNA序列和对照Dicer Mock序列进肾透明细胞癌细胞系786-O和ACHN,采用Western blot法检测转染后Dicer在细胞系中的沉默效率,并通过MTS法和流式细胞仪检测细胞增值率和细胞周期的变化,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力的变化。结果:和正常肾小管上皮细胞系HKC相比,Dicer的表达水平在肾透明细胞癌细胞系786-O和ACHN中均降低,而转移性肾透明细胞癌细胞系ACHN比非转移性肾透明细胞癌细胞系786-O表达水平更低(p值均<0.05);和癌旁正常肾组织相比,Dicer的表达水平在肾透明细胞癌组织中明显降低,且已发生远处转移的肾透明细胞癌组织比未发生远处转移的肾透明细胞癌组织表达水平更低(p值均<0.05),同时Dicer的mRNA水平与肾透明细胞癌的总TNM临床分期呈显著相关(p<0.05)。在786-O和ACHN细胞系的功能实验中,与未转染组和转染Dicer Mock序列组比较,MTS法显示转染Dicer siRNA序列组的增值率明显上升,流式细胞仪检测显示转染Dicer siRNA序列组的S期细胞比例明显增加伴随G0/G1细胞比例明显减少,Transwell法显示转染Dicer siRNA序列组的迁移细胞数和侵袭细胞数明显增多(p值均<0.05)。结论:Dicer表达降低可能在肾透明细胞癌的肿瘤发生中发挥作用,且其表达的进一步下降可能与肾透明细胞癌的远处转移有关。
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