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目的沙门氏菌是一大群寄生于人类和动物肠道中的革兰氏阴性菌,属于肠道菌群,是引起人类腹泻的主要病原体。卵黄免疫球蛋白IgY (Immunoglobulin yolk),也称为卵黄抗体。在结构和免疫特性上不同于哺乳动物的免疫球蛋白IgG,与IgG相比具有物理化学稳定等多种优点。因此,IgY作为替代传统哺乳动物抗体的潜力受到广泛的关注。本文用减毒沙门氏菌作为抗原免疫母鸡制备成抗沙门氏菌的IgY (AS-IgY),并对其理化性质和生物学活性进行分析,这为沙门氏菌的治疗和预防性抗体的研制奠定基础。方法1.免疫原为减毒沙门氏菌菌株Ty21a型,为沙门氏菌K抗原类。2.6月龄雌性健康产蛋京白鸡,体重1300±100g,每周产蛋5-6枚,正常饲养1周后免疫。3.用减毒沙门氏菌菌株Ty21a作为抗原,按照109个细胞/只鸡免疫进行接种;初次免疫时加入等量的福氏完全佐剂,分别于双翅膀皮下、左右背部皮下进行点注射。以后每2周免疫1次,共3次,但不加佐剂,剂量、部位同初次免疫。末次免疫后,每2个月强化免疫1次,使抗体维持在一个较高的水平。免疫1周后,收集鸡蛋并做好标记,4℃保存备用。4.收集免疫前及免疫后第15、20、25、30、35、40、45天的鸡蛋为研究对象。AS-IgY抗体的纯化采用去除蛋清,收集卵黄液经过蒸馏水粗提,50%饱和硫酸铵盐析,透析、以及聚乙二醇浓缩等步骤得到纯化的IgY抗体。5.通过蛋白质定量后,再经过SDS-PAGE、Western blot和ELISA等方法对所纯化抗体的特性进行鉴定。6.通过体外抑菌实验验证其生物学活性。结果免疫后10天左右,即可从卵黄中检测出特异性IgY抗体,30天左右抗体量达到高峰,每个卵黄可提取100～200mg抗体。该抗体具有较强的热稳定性和耐酸性,效价可持续2～6个月。还原性SDS-PAGE显示该抗体呈现两条带,分子量约20KD和70KD。ELISA结果显示,IgY与链球菌、白色念珠菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等其他抗原之间无交叉反应,并可在体外抑制沙门氏菌的生长。结论1.已成功制备出高纯度的抗沙门氏菌IgY抗体(AS-IgY)。2.通过SDS-PAGE、Western blot以及ELISA等对其理化性质的分析结果表明,此抗体是一种耐酸、耐热、产量高并且制备简便的新型抗体。3.AS-IgY抗体在体外能够抑制沙门氏菌的生长,与无关抗原无交叉反应。4.AS-IgY抗体有可能为沙门氏菌感染的治疗和预防提供新的研究手段。