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研究目的:人气道平滑肌细胞作为气道最主要的组成部分,其形态功能异常是哮喘的重要病理生理变化之一,血小板源性生长因子在损伤的气道上皮细胞中有较高的表达,可以刺激平滑肌细胞的增生以及细胞内多种蛋白的合成增加,从而引起平滑肌细胞形态、功能的改变,故血小板源性生长因子在哮喘的发生发展中发挥着重要的作用。a-肌动蛋白是人气道平滑肌细胞的特征性标志物,其含量可以反映人气道平滑肌细胞的数量及其收缩能力的改变。作为最具代表性的mRNA结合蛋白,HuR可与目的蛋白mRNA 3’UTR的AREs结合,从细胞核穿梭入细胞质,使mRNA翻译增加,下游蛋白表达量增加;研究表明,α-肌动蛋白mRNA的3’端也存在AREs,所以我们猜测,HuR蛋白可能与α-SMA mRNA 3’UTR的AREs结合,增强其稳定性,从而增加a-SMA蛋白量的表达。本研究采用体外培养人气道平滑肌细胞的方法,应用血小板源性刺激因子刺激模拟哮喘的病理状态,观察HuR蛋白对人气道平滑肌细胞中α-SMMA表达的影响。研究方法:1.分组:①PDGF 0 h组;②PDGF 6 h组;③PDGF 12 h组;④PDGF 24 h组; ⑤siRNA+PDGF 0 h组;⑥siRNA+PDGF 12 h组;⑦consiRNA+PDGF 0 h组; ⑧consiRNA+PDGF 12 h组;2.应用Western blot,检测血小板源性刺激因子刺激后,人气道平滑肌细胞中人抗原R蛋白、α-SMA蛋白的水平。3.应用RT-PCR方法,检测各组人气道平滑肌细胞中HuR及α-SMA的RNA水平。4.使用siRNA沉默HuR蛋白,研究血小板源性刺激因子对人气道平滑肌细胞中α-SMA表达的影响。结果:血小板源性刺激因子呈时间依懒性增强细胞内HuR及α-SMA的表达,各组细胞HuR蛋白及mRNA相对表达量分别为:①PDGF刺激0 h组:0.23±0.09、1.00±0.00: ②PDGF刺激6 h组:0.42±0.11、1.09±0.03:③PDGF刺激12 h组:0.93±0.21、1.16±0.03;④PDGF刺激24 h组:1.37±0.28、1.27±0.02;(均P<0.05);各组α-SMA蛋白以及mRNA相对表达量分别为:①PDGF刺激0 h组:1.03±0.08、1.00±0.00;②PDGF刺激6 h组:1.20±0.09、1.17±0.02;③PDGF刺激12 h组:1.39±0.11、1.23±0.02;④PDGF刺激24 h组:1.58±0.10、1.45±0.03;(均P<0.05)。siRNA特异沉默HuR后,α-SMA表达量也相应减弱。HuR沉默后,平滑肌细胞中PDGF诱导的α-SMA的表达减少,HuR及α-SMA的蛋白相对表达量分别为:consiRNA+PDGF 0 h组:1.20±0.11、0.344±0.07;consiRNA+PDGF 12 h组:1.50±0.10、0.82±0.12; siHuR+PDGF 0h组:1.23±0.13、0.37±0.09;siHuR+PDGF12h组:0.89±0.11、0.35±0.08。siHuR+PDGF0h组与consiRNA+PDGF 0 h组HuR及α-SMA蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P>0.05),而特异的HuR干扰RNA转染细胞能显著降低HuR的表达,siHuR+PDGF 12h组HuR蛋白相对表达量显著低于consiRNA+PDGF 12h组(P<0.05);同时PDGF诱导的a-SMA蛋白表达升高受到显著抑制,siHuR+PDGF 12h组α-SMA蛋白相对表达量低于consiRNA+PDGF 12h组(P<0.05)。结论:1.PDGF刺激可增力HBSMC中HuR及α-SMA的表达;2.HuR参与PDGF诱导的α-SMA表达过程。