整合素是一类广泛存在的细胞粘附受体,主要是由α亚基以及β亚基组成。其中,整合素β3亚基不仅可与αIIb亚基结合形成αIIbβ3,还可与α?亚基结合形成整合素α?β3。整合素αIIbβ3是血小板及巨核细胞表面最丰富的受体,主要介导血小板的双向信号传导。目前,已知大约有一半的人类血小板抗原（Human platelet antigen,HPA）位于整合素β3胞浆段。整合素?IIb?3完全或部分的缺失可导致血小板无力症（Glanzmann thrombasthenia,GT）,主要表现为由血小板功能受损导致的出血时间延长,粘膜及皮肤的出现。?3^-/-小鼠作为GT的模型已被广泛用于科研中,但是否该模型能完全模拟人类GT,其血液学特性如何,尚不是很清楚。胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（Fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia,FNAIT）是一种严重的出血性疾病,主要是由于胎儿和母体血小板表型不符合,主要风险是颅内出血,致死率较高。目前有关FNAIT的发病机制及治疗尚不完善,本实验拟使用整合素β3基因缺陷(β3^-/-)小鼠建立FNAIT模型,以进一步研究FNAIT。目的:1.通过繁殖鉴定血小板无力症模型β3^-/-小鼠,探究整合素β3基因缺陷的小鼠血液学特性。2.利用β3^-/-小鼠初步建立FNAIT模型,为进一步研究FNAIT的发病机制及治疗奠定基础。方法:1.繁殖并鉴定整合素?3基因敲除的纯合子小鼠(β3^-/-);2.通过阶梯离心的方法提取整合素β3基因缺陷小鼠的血小板,流式检测β3^-/-小鼠血小板表面整合素β3亚基的表达;3.提取β3^-/-小鼠血小板蛋白,通过蛋白印迹杂交实验（Western blot）检测β3^-/-小鼠血小板表面整合素β3亚基的表达;4.β3^-/-小鼠心脏采血,血细胞计数,外周血涂片,对β3^-/-小鼠脾脏进行称重、计算脾脏比重,脾脏及骨髓组织切片,利用β3^+/+小鼠通过定期放血的方法模拟慢性失血性模型（Chronic hemorrhagic model,CHM）;5.通过β3^-/-小鼠血小板游离纤维蛋白原结合、聚集、粘附、伸展以及流体剪切力下的血栓形成等实验探究β3^-/-小鼠血小板的特征;6.观察β3^-/-小鼠胚胎期皮下出血情况、小鼠剪尾后出血时间;7.通过将β3^+/+小鼠的血小板通过尾静脉注射至β3^-/-小鼠体内,使其免疫,取免疫后β3^-/-小鼠的血清,通过流式检测免疫后β3^-/-小鼠的血清中的抗体;8.将免疫后β3^-/-雌鼠与β3^+/+雄鼠交配,初步建立FNAIT模型。结果:1.PCR成功鉴定β3^-/-小鼠基因型;2..流式细胞仪检测到β3^-/-小鼠血小板表面不表达整合素β3亚基;3.Western blot结果提示β3^-/-小鼠血小板中无整合素β3亚基表达;4.血细胞计数提示β3^-/-小鼠贫血,外周血涂片红细胞呈小细胞低色素,β3^-/-小鼠脾脏明显大于β3^+/-和β3^+/+小鼠,免疫组化发现脾组织CD3和CD19表达无异常,CD71表达升高,慢性失血性模型小鼠的脾脏明显增大,考虑β3^-/-小鼠脾脏增大与贫血髓外造血有关;5.β3^-/-小鼠血小板纤维蛋白原结合、聚集、粘附、伸展等功能明显受损,流体下血栓形成受损;6.胚胎β3^-/-小鼠较β3^+/-及β3^+/+小鼠易出血,β3^-/-小鼠剪尾后出血时间延长;7.流式细胞仪检测出免疫后β3^-/-小鼠体内有抗整合素β3抗体存在;8.免疫后β3^-/-雌鼠与β3^+/+雄鼠交配,不易产出后代,并且容易流产,孕鼠易死亡。结论:通过探究β3^-/-小鼠的血液学特性证明了整合素β3亚基缺陷可致小鼠出血增加,血栓形成能力下降;成功检测出免疫后β3^-/-小鼠血清有抗整合素β3抗体的存在,免疫后β3^-/-小鼠不易怀孕,易流产,并且怀孕后易出现死亡,成功建立了FNAIT小鼠模型,为进一步研究FNAIT的发病机制及治疗奠定了基础。