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广西是罗非鱼养殖及加工出口主要基地。罗非鱼加工过程中产生的大量鱼骨、鱼鳞、鱼皮等下脚料,目前都未能得到很好的利用。本文以罗非鱼加工下脚料为原料,在制备胶原肽的同时将鱼骨鱼鳞中的钙转化为活性钙,同时获得两个高附加值产品,具有良好的经济价值和社会效益。
论文研究了有机酸脱除鱼骨鱼鳞钙的酸化条件及钙回收条件,结果表明,乳酸比柠檬酸具有更强的溶解鱼骨鱼鳞钙的能力。采用20%乳酸,以1:9固液比35℃下酸解骨鳞原料10h,鱼骨磷中钙的溶出率为88.12%。浸酸清液经真空浓缩至6.2~6.7浓缩比后,将浓缩液循序降温至5℃并保持3h,使乳酸钙结晶析出。经固液分离、精制、干燥后,得到纯度为98.3%乳酸钙晶体。
研究了酶法制备胶原肽工艺。以蛋白质水解度为评价指标,比较动物蛋白酶、风味酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和Alcalase酶的酶解效率,确定Alcalase酶和胰蛋白酶为最佳酶。采用正交试验研究单酶水解最佳作用条件并比较多酶水解方式对酶解效率的影响。结果表明:下脚料首先加入3000U/g的Alcalase酶,在55℃、pH7.5下酶解4h,再加入3500U/g的胰蛋白酶,在50℃、pH8.0下酶解4h,这种双酶分步水解方式,胶原蛋白水解度最终达到41.21%。
研究了罗非鱼下脚料酶解液的脱腥脱色工艺。以活性炭为吸附剂,以感官评价值和蛋白质损失率为评价指标。在水解液中添加1.0%的活性炭,温度40℃保温搅拌35min后,腥味显著减弱,与此同时,蛋白质损失7.06%,脱色率达到42.7%,表面疏水性指数S0为2.69。最终经过真空浓缩,干燥后,可制成得率为25.97%的粗肽。
采用Tricine-SDS-PAGE电泳法测定罗非鱼下脚料胶原水解物的相对分子质量,结果显示,水解物主要由三部分组成,它们的相对分子质量为3.94kDa、6.3kDa和27.9kDa。
采用截留分子量分别为10kDa、5kDa的超滤膜分离胶原水解物,将胶原水解物分离为三个组分:THBU-Ⅰ(M>10kDa)、THBU-Ⅱ(M=5~10kDa)、THBU-Ⅲ(M<5kDa)。这三个组分分别占水解物的10.83%、17.49%、71.65%。说明罗非鱼胶原水解物以小分子胶原肽为主,其中89%的水解产物平均相对分子质量小于10 kDa。
比较经超滤膜分离后的三个胶原肽组分对DPPH自由基、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)、H2O2的抑制作用及抗脂质过氧化作用,结果显示,三个组分均具备一定得抗氧化活性,同时随着胶原肽相对分子质量越小,其抗氧化活性越高。其中THBU-Ⅲ(M<5kDa)对清除·OH、H2O2的能力和抗脂质体抗氧化活能力与Vc十分接近。