目的:党参是很多亚洲国家如中国、日本、韩国等广泛使用的大宗药材,也是一种药食同源中药材。党参多糖是党参中含量最高的活性成分,具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤和抗炎等多种生物活性。课题组前期研究发现党参主多糖CPA对胃溃疡、溃疡性结肠炎等疾病具有良好的疗效,且毒副作用低、生物相容性较好,被认为是一种天然来源的有广阔应用前景的新药候选分子。然而,多糖化学结构复杂,缺乏紫外吸收基团和荧光基团,很难实现体内的示踪研究及组织分布的定量检测,截至目前,CPA的体内药代动力学信息尚未有报道,这严重限制了其作为新药候选分子的进一步研发。而明确CPA的药代动力学特征及体内过程,可对其能否作为预期候选药物作出初步判断,对确定给药途径、剂量和剂型研究至关重要。因此,本研究旨在建立一种简单、高效的检测党参多糖CPA浓度的方法,并用于评价党参多糖在小鼠体内的药代动力学、组织分布及排泄特性。方法:1.党参多糖CPA不同荧光标记产物FCPA和F-NH-CPA的制备及表征本实验将异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocyanate isomer,FITC）通过直接和间接两种标记方法对CPA进行荧光标记,并采用红外光谱仪、紫外可见分光光度计以及高效凝胶渗透色谱对FCPA和F-NH-CPA进行结构鉴定,利用多功能酶标仪测定荧光取代度,并考察了FCPA和F-NH-CPA在体内外的稳定性;通过结构鉴定及稳定性考察最后确定F-NH-CPA用于体内药代动力学研究。2.荧光标记产物F-NH-CPA在生物样本中定量检测方法的建立采集雄性健康BALB/c小鼠的血液样本,并收集肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠、粪、尿等生物样本,建立F-NH-CPA在不同生物样本中的标准曲线,并考察日内和日间精密度、准确度和稳定性。3.党参多糖CPA口服给药后的药代动力学将雄性健康BALB/c小鼠随机分为3组,每组分别灌胃给予低、中、高不同浓度的(28、56和112 mg kg-1)F-NH-CPA,于不同时间点（30、60、120、240、360和480 min）采集血液样本,并收集小鼠的肝、肺、肾、胃、大肠和小肠等生物样品,利用多功能酶标仪检测F-NH-CPA在不同时间点血浆及组织样品中的荧光强度。排泄研究:18只BALB/c小鼠被随机分为3组（每组6只）,将小鼠置于代谢笼中,分别灌胃给予三种不同剂量的F-NH-CPA(28、56和112 mg kg-1),收集给药后0-1、1-2、2-4、4-6、6-8、8-12、12-24 h的粪便和尿液,将粪便和尿液处理后,利用多功能酶标仪检测F-NH-CPA的荧光强度。4.党参多糖CPA静脉给药后的药代动力学将雄性健康BALB/c小鼠随机分为3组,分别尾静脉注射低、中、高不同浓度的(7、14和28 mg kg-1)F-NH-CPA,于不同时间点（10、30、60、120、240、360和480 min）采集血液样本,并收集小鼠的肝、脾、肺、肾、胃、大肠、小肠等生物样品,利用多功能酶标仪检测F-NH-CPA在不同时间点血浆及组织样品中的荧光强度。结果:1.党参多糖CPA不同荧光标记产物FCPA和F-NH-CPA的制备及表征本实验将异硫氰酸荧光素FITC通过直接和间接两种标记方法对CPA进行荧光标记。高效凝胶渗透色谱、红外光谱分析以及紫外光谱分析结果表明,两种方法FITC均可与CPA结合,且直接法和间接法FITC的取代度分别为0.88%和1.07%。稳定性研究发现,在体外,两种方法合成的荧光标记物在血浆、人工胃液、人工肠液等不同生物介质中稳定性均较好;体内研究发现,静脉给药后,直接法合成的FCPA在血浆中主要以原型形式存在,有部分FITC脱落;而间接法合成的F-NH-CPA在体内可降解成分子量小的糖,但未检测到游离的FITC,说明间接法荧光标记产物较稳定。因此,本实验认为间接法合成的F-NH-CPA稳定性较好,更适合应用于CPA的药代动力学研究。2.荧光标记产物F-NH-CPA在生物样本中定量检测方法的建立考察F-NH-CPA在生物样品中的线性关系、日内和日间精密度、准确度以及稳定性,结果显示不同生物样品中F-NH-CPA在0.10～25.00μg m L-1和0.78～50.00μg m L-1范围内线性关系良好。准确度、日内精密度、日间精密度均在可接受范围内。含有F-NH-CPA的生物样品于不同条件下保存后均保持稳定。证明本方法适用于F-NH-CPA在小鼠血浆、组织、排泄物等生物样品中含量的测定。3.党参多糖CPA口服给药后的药代动力学F-NH-CPA经口服给药后,血浆中浓度逐渐增大,在1 h达到峰值后逐渐降低。小鼠口服三种剂量下平均消除半衰期(Half life,T1/2)较长,在小鼠体内消除较慢,药时曲线下面积(Area under curve,AUC（0→∞）)和最大峰浓度(Peak concentration,Cmax)与剂量呈正相关,表明CPA在小鼠体内呈现线性代谢动力学特征。CPA口服生物利用度低,吸收差,在体内组织分布广泛,在胃肠道组织分布最多,主要经粪便排泄。4.党参多糖CPA静脉给药后的药代动力学静脉给药后,F-NH-CPA在循环系统中浓度缓慢下降,半衰期和平均滞留时间较长,清除率较低,在体内消除较慢。药时曲线下面积AUC（0→∞）和最大峰浓度Cmax与给药剂量呈正相关,表明CPA在小鼠体内呈现线性动力学特征。F-NH-CPA主要聚集在胃、肾、脾,肺内浓度较低,并且F-NH-CPA浓度在肝脏中降低较快,而在小肠和大肠中缓慢降低。结论:本研究建立了一种简便、灵敏的荧光标记方法,用于检测菊粉型果聚糖在生物样品中的浓度,将建立的方法应用于小鼠口服和静脉给药后的药代动力学行为的评价。结果表明,该方法适用于多糖浓度的测定。在静脉和口服两种给药过程中,F-NH-CPA在循环系统中的浓度缓慢下降,T1/2和MRT较长。口服F-NH-CPA可被血液吸收,生物利用度低。F-NH-CPA是通过尿液和粪便排泄的。本研究为CPA的体内过程提供全面的认识,对CPA口服制剂的开发和应用具有重要意义。