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近年研究表明,LncRNA通过对.miRNA、蛋白等物质的调节来影响不同信号通路,在生命活动中起着重要作用。同时,其表达异常对肿瘤的发生和预后都有着至关重要的作用。目前,在已发表的文章中,未发现Lnc00665的相关报道,因此本文对Lnc00665的功能进行研究。课题组前期发现在脑胶质瘤细胞中,Lnc00665过表达可促进细胞增殖、迁移与侵袭能力。为了对此功能进行进一步确认,本论文将从Lnc00665表达下调的角度,进一步研究Lnc00665对细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响。我们利用RNAi技术,对脑胶质瘤细胞中Lnc00665不同位点进行干扰,使Lnc00665表达下调并构建稳转细胞系。通过MTT增殖曲线实验及克隆形成实验发现,当Lnc00665表达下调时,胶质瘤细胞增殖速度显著降低;通过细胞周期、Annexin V/PI双染实验和Caspase 3/7活性分析发现,Lnc00665表达下调后,细胞周期时相被阻滞到G1期,而且细胞凋亡显著增加;通过q RT-PCR发现,与细胞增殖相关的C-myc表达量在RNA水平显著降低。进一步利用Transwell小室进行迁移、侵袭实验发现,当Lnc00665表达下调时,胶质瘤细胞迁移侵袭能力明显下降;与迁移侵袭相关的Tenascin-C表达量显著降低。由此证明Lnc00665表达下调后抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。为了研究Lnc00665的调控机制,利用生物信息学分析发现,mi R-1224-5p可能直接与Lnc00665相互作用。利用荧光素酶双报告系统实验,证实Lnc00665为miRNA-1224-5p的直接作用靶标。为了进一步研究miRNA-1224-5p对脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,我们将miRNA-1224-5p mimic转染到胶质瘤U251细胞中,通过MTT增殖曲线和克隆形成分析发现,当miRNA-1224-5p过表达后,U251细胞增殖能力明显降低;利用细胞周期分析发现,miRNA-1224-5p过表达后细胞周期时相被阻滞到G1期;同时,应用Annexin V/PI双染实验与Caspase 3/7的活性分析发现,当miRNA-1224-5p过表达后,细胞凋亡的数量显著增加,而且Lnc00665的过表达可以明显回复miRNA-1224-5p对胶质瘤细胞诱导凋亡的效应;通过q RT-PCR发现,miRNA-1224-5p过表达后,C-myc表达水平明显降低。进一步利用Transwell小室实验发现,当miRNA-1224-5p过表达后,胶质瘤细胞迁移和侵袭能力明显下降,Tenascin-C表达量显著降低。由此证明miRNA-1224-5p表达上调后抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。上述实验结果证明miRNA-1224-5p通过调控Lnc00665的表达来抑制脑胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力。本研究为脑胶质瘤诊断和治疗提供一定的线索。