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本文以‘银龙须’(Dendranthema morifolium Tzvel. cv.‘Yinlongxu’)、‘久米城’(Dendranthema morifolium Tzvel. cv.‘Jiumicheng’)、‘杭白菊’(Dendranthema morifolium Tzvel. cv.‘Hangbaiju’)和‘菊花脑’(Dendranthema nankingense Hand.)等四种食用菊属植物为研究材料,系统研究了其快繁体系及‘银龙须’原生质体培养中多种因素的影响,主要结果如下:(1)以温室材料为外植体时,各材料达到最佳再生和增殖系数的培养条件分别为:‘银龙须’以茎段为外植体,培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L;‘久米城’以茎尖为外植体,培养基为MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.1mg/L;‘杭白菊’和‘菊花脑’均适合以茎段为外植体,前者培养基为MS+6-BA4.0mg/L+NAA0.2mg/L;后者培养基为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L;采用无菌苗器官为外植体时,以叶柄的增殖频率为最高达6.95,而叶片愈伤诱导效果好,MS9有益于愈伤组织增殖,来源于茎段和叶柄的愈伤组织再生能力强,而根尖诱导的愈伤组织无再生能力。(2)‘银龙须’无菌苗叶片适于原生质体游离;在人工气候箱中生长30d的无菌苗叶片所游离的原生质体的分裂频率达48.2%;酶液成分为600mg/L MES、4g/L肌醇、0.55mol/L甘露醇、纤维素酶和果胶酶的浓度分别为4×103 mg/L和0.25×103 mg/L;酶解温度为25℃酶解时间为15h,为30℃时为6h; 25%的蔗糖溶液适宜于原生质体纯化合收集。(3)不同处理可改变原生质体生理状态,提高‘银龙须’原生质体培养效果。激素预处理可提高原生质体分裂频率及细胞团形成率,但从生长在MS中的无菌幼苗分离所得到原生质体后续分裂能力强,褐化频率低;游离前将材料2℃处理4d后可提高原生质体分裂频率及细胞团率,加速愈伤组织形成;游离后30℃处理3d可提高原生质体分裂频率及细胞团形成率;酶解前黑暗1d处理有效提高质膜稳定性并可降低褐化频率;而13%-甘露醇溶液预处理可大幅提高原生质体稳定性和细胞团形成率。(4)‘银龙须’原生质体适宜的培养方式为双层培养,培养皿直径大小为9cm,液体培养基以8ml为宜,‘银龙须’培养密度为1×105个/ml时原生质体分裂频率达到最大值45.6%,培养10d添加降渗培养基后,继续暗培养1周再转入光照下培养,对细胞团生长和增殖效果最好。(5)不同培养基组分对‘银龙须’原生质体培养效果有不同影响。以1/2MS为基本培养基,附加50 mg.L-1抗坏血酸(VC)、333mg.L-1Cacl2、1×104 mg.L-1蔗糖、600 mg.L-1 2-N-吗啉乙烷磺酸(MES)、100mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。试验表明,适宜的渗透压稳定剂为0.15mol.L-1甘露醇、葡萄糖0.4mol.L-1,附加肌醇4000mg.L-1可提高细胞团形成频率,但其存在褐化效应。高浓度NH4+导致细胞团褐化,用200 mg.L-1水解酪蛋白及400 mg.L-1谷氨酰胺替代NH4+,对提高菊花叶肉原生质体分裂频率、细胞团形成率及降低褐化均有显著效应。Mg2+使首次分裂时间提前,提高原生质体分裂频率。适宜的激素浓度为0.1mg.L-12,4-D, 1 mg.L-1NAA和0.1 mg.L-16-BA。所得的愈伤在MSB附加0.1 mg.L-16-BA, 0.5 mg.L-12,4-D的培养基中得到再生植株,再生频率为7.69%,在附加0.1 mg.L-12,4-D,1.0 mg.L-1NAA, 0.1 mg.L-16-BA的培养基中获得再生根,根分化频率为15.4%。(6)褐化是影响‘银龙须’原生质体培养成功与否的关键之一,生理状态、培养密度、激素种类、渗透压稳定剂、渗透压大小、培养方式、NH4+浓度、肌醇、培养温度、光照等因素均与褐化相关。