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非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一种以肝细胞脂肪变性和不同程度的肝损伤,炎症及纤维化为特征但无过量饮酒史的临床综合征。非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是NAFLD进展的重要中间阶段,也是隐源性肝硬化的重要病因。随着人们生活水平的提高,非酒精性脂肪性肝病逐渐成为人们最为普遍关注的公共健康问题之一,但其发病机制尚未完全阐明。研究发现肥胖、2型糖尿病和血脂异常往往与NAFLD共同存在,而胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)是这些代谢性疾病的潜在致病因素,在NAFLD的发病机制中起着至关重要的作用。细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)是新近发现的SOCS家族重要成员之一,通过抑制JAK—STAT信号转导通路发挥作用,是许多细胞因子功能的关键生物调节因子,包括对前炎性因子IL-6的调节。研究发现肝脏SOCS-3的过表达可引起胰岛素抵抗和肝内调节脂肪酸合成的关键因子SREBP-1c的增加。因此干预SOCS蛋白在肝脏的异常表达为防治脂肪肝提供了新的方向。本实验研究了高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎大鼠SOCS-3、IL-6和SREBP-1c的表达变化,并给予与噻唑烷二酮类药物有相似的减轻IR作用的替米沙坦进行干预,观察它对肝脏脂肪变及炎症程度和胰岛素抵抗的作用,这对深入认识NAFLD的发病机制具有重要意义,并为脂肪肝和代谢综合征相关的肥胖、糖尿病提供了新的治疗靶点。目的:(1)通过高脂饮食制作非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型;(2)探讨SOCS-3在NASH发病过程中的作用;(3)观察替米沙坦对实验性NASH的治疗效果,探讨其可能的分子机制。方法:35只雄性SD大鼠,体重140±10g,适应性喂养1周后随机分为3组,正常对照组(A组)10只,给予基础饲料喂养;造模组(B组)15只,干预组(C组)10只,均给予配方为88%基础饲料+10%猪油+2%胆固醇的高脂饲料喂养。实验动物均饲养于标准环境,自由饮水进食。12周后随机选取B组中5只处死,取肝脏组织HE染色后光镜下观察肝脏组织病理学改变,以确定NASH大鼠模型制作成功。自13周始C组给予替米沙坦(5 mg·kg- 1·d-1)灌胃,A组与B组给予等量生理盐水灌胃。每周记录动物体重1次,根据体重变化调节灌胃计量,连续进行至16周末给药期结束,处死全部大鼠。(1)观察肝脏大体情况,完整切除肝脏并称重(2)肝组织切片HE染色观察肝脏病理改变(3)生化法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)(4)罗氏血糖仪测定空腹血糖(FBG),化学发光法测定血清胰岛素(FINS),并根据公式计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR) (5)放射免疫分析法测定血清白细胞介素-6(IL-6)水平(6)半定量RT-PCR法检测肝组织SOCS-3和SREBP-1c基因水平的变化。结果:1高脂饮食大鼠12周进展为脂肪性肝炎,即高脂饮食成功制造了NASH大鼠模型。2体重、肝脏指数(肝湿重/体重×100%) 16周末造模组大鼠体重显著高于正常对照组(P <0.01),干预组大鼠体重高于正常对照组(P <0.05) ,但显著低于造模组(P <0.01)。造模组与干预组大鼠肝湿重显著高于正常对照组(P <0.01),干预组显著低于造模组(P <0.01)。造模组与干预组大鼠肝脏指数显著高于正常对照组(P <0.01),干预组低于造模组,差异有统计学意义(P <0.05)。3 TG、TC、HDL-C、ALT、AST造模组大鼠血清TG显著高于正常对照组(P <0.05),干预组与造模组间差异无统计学意义(P >0.05)。造模组与干预组TC与HDL-C均高于正常对照组(P <0.05),造模组与干预组间差异无统计学意义(P >0.05)。造模组与干预组ALT显著高于正常对照组(P <0.01),干预组较造模组相比,有显著降低(P <0.01)。造模组AST高于对照组(P <0.05),干预组与造模组相比有所降低,但差异无统计学意义(P >0.05)。4空腹血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数造模组大鼠FBG显著高于正常对照组(P <0.01),干预组显著低于造模组(P <0.01),干预组与正常对照组相比,差异无统计学意义(P >0.05)。造模组与干预组大鼠FINS显著高于正常对照组(P <0.01),干预组与造模组相比,有显著降低(P <0.01)。各组大鼠HOMA-IR变化同FINS变化。5血清IL-6水平造模组大鼠血清IL-6水平显著高于正常对照组(P <0.05),干预组与正常对照组相比,差异无统计学意义(P >0.05),干预组与造模组相比较,有降低趋势,但差异无统计学意义(P >0.05)。6肝脏病理学改变模型组大鼠12周肝组织于光镜下观察可见弥漫性肝细胞脂肪变性,伴有炎症细胞浸润及坏死。随造模时间延长脂肪变程度逐渐加重,16周脂肪变程度以重度为主,以中央静脉周围最明显,并可见程度不等的小叶内炎症、汇管区炎症及点灶状坏死,甚至部分坏死融合成片,形成桥接坏死,部分大鼠肝组织出现窦周纤维化。与模型组相比,药物干预组可明显改善肝细胞脂肪变性,炎症程度也有一定减轻,未见明显纤维化。7肝组织SOCS-3、SREBP-1c mRNA表达水平正常对照组大鼠肝组织仅有少量SOCS-3表达;造模组肝组织SOCS-3表达较正常对照组显著增强(P <0.01);干预组较正常对照组SOCS-3表达显著增强(P <0.01),但较造模组显著下调(P <0.05)。正常对照组大鼠肝组织仅有少量SREBP-1c表达;造模组肝组织SREBP-1c表达较正常对照组显著增强(P <0.01);干预组较正常对照组SREBP-1c表达显著增强(P <0.01),但较造模组显著下调(P <0.01)。8相关分析肝组织SOCS-3 mRNA表达水平与血清IL-6水平存在正相关(r为0.369,P <0.05);与SREBP-1c mRNA表达水平和胰岛素抵抗指数间均成强正线性相关(r分别为0.698、0.643,P <0.01)。结论:1.高脂饮食可成功建立大鼠NASH模型。2.SOCS-3、SREBP-1c、IL-6在NASH发病过程中可能起到了重要作用,对深入认识NASH的发病机制具有重要意义。3.替米沙坦可显著减轻NASH大鼠肝细胞脂肪变,改善肝功能和胰岛素抵抗,对NASH能够起到一定的治疗作用其机制可能与降低肝脏SOCS-3及SREBP-1c的表达有关。