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背景髓样分化因子 88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是连接 Toll样受体(Toll like receptor,TLR)与蛋白激酶的一种关键蛋白,接受TLR3外所有TLRs的传导信号,进而激活细胞核内多种转录因子,生成免疫活性物质,以抵御外来病原体的入侵。MyD88在抗机体抵抗病原体感染过程中发挥的作用已在多个物种中被证实,然而对软体类动物湖北钉螺(Oncomelania hupensis)MyD88的研究未见报道。日本血吸虫感染中间宿主湖北钉螺后,毛蚴与螺体之间与固有免疫相关的相互作用仍不清楚,研究钉螺固有免疫TLR信号通路中的关键接头分子MyD88,有助于探索并完善感染早期钉螺体内发生的抗血吸虫固有免疫防御机制。目的克隆、鉴定湖北钉螺髓样分化因子88-1(O.HupensisMyD88-1)基因,通过观察感染日本血吸虫前后,钉螺各组织中MyD88-1 mRNA表达水平的变化,探讨其在抗血吸虫感染中的地位。方法在前期获得部分MyD88-1片段的基础上,使用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)获取湖北钉螺 MyD88-1 全长 cDNA序列,预测其蛋白结构以及保守区域,并与多物种MyD88氨基酸序列进行比对,构建系统进化树。在RNA水平上,利用实时荧光定量(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和原位杂交(In Situ Hybridization,ISH)试验检测感染血吸虫前后,钉螺各组织中MyD88-1 mRNA表达水平的变化。结果湖北钉螺MyD88-1全长cDNA的开放阅读框为1406 bp,编码468个氨基酸,氨基酸序列N端和C端分别存在死亡结构域和TIR结构域。与其他软体类MyD88氨基酸序列相比,相似性为38%-52%。氨基酸进化树提示,钉螺MyD88-1和光滑双脐螺MyD88起源于共同的祖先基因。qPCR结果显示,在所检测的钉螺组织中均有MyD88-1 mRNA的表达,于血淋巴细胞中表达最为丰富。被日本血吸虫感染后,除头足外,钉螺MyD88-1 mRNA在肝脏、生殖腺、血淋巴细胞中均上调表达,以血淋巴细胞中上调表达最明显,高出对照组的4.4×10~4倍。原位杂交试验检测显示,正常螺体MyD88-1 mRNA主要在肝脏、生殖腺的腺体细胞质内表达,血吸虫感染6h、12h、96h后腺体细胞内MyD88-1mRNA表达增多;正常螺体与感染螺体头足部肌肉细胞内均未检测到MyD88-1 mRNA的表达。结论湖北钉螺体内存在依赖MyD88的TLRs信号通路,该信号通路在血吸虫感染早期主要通过血淋巴细胞发挥抗感染作用。