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目的：快速构建人鼻咽癌组织cDNA文库，以SEREX方法从cDNA文库中筛选鼻咽癌抗原基因。 方法：采用初诊鼻咽癌患者新鲜活检组织，抽提总RNA，以含有SfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第一链cDNA，同时利用SMART(Switching Mechanism at 5’ end of RNA Transcript)技术以含SfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA，双链cDNA经SfiI(IA&IB)酶切后，以CHROMA SPIN-400柱分级分离cDNA，收集符合需要的cDNA片段并纯化，随后将之与入TripIEx2载体连接，经体外包装成噬菌体cDNA文库。测定原始文库滴度，进行蓝白筛选以确定文库的重组率，并随机挑取克隆经PCR扩增鉴定插入片段大小。抽取同一患者自身的外周静脉血分离血清，经预吸收细菌XL1-Blue裂解物处理后，“一对一” 地血清学筛选所构建的鼻咽癌组织cDNA表达文库，阳性克隆经PCR检测鉴定后进行序列分析。 结果：经测定原始文库滴度为7.28×10~6pfu／ml，含3.64×10~6个重组子，重组率为94％，扩增文库滴度为3.8×10~9pfu／ml，cDNA插入片段大小在0.5～3.0kb之间，平均为1.2kb。文库经三轮血清学筛选共获得23个阳性克隆，经PCR扩增后进行测序分析及与相关数据库比对，分别代表了16个独立的cDNA插入片段(抗原基因)。其中10个与已知基因高度同源，另外6个基因与GenBank中已知基因的部分同源，其中有3个可能是新基因。 结论：利用SMART技术构建的人鼻咽癌组织cDNA表达文库，文库质量较高，有利于以cDNA文库为基础的进一步的实验研究。应用 硕士学位论文 摘要．S朋以技术初步筛选鼻咽癌组织CDM文库，共得到16个鼻咽癌相关 ～抗原基因，其中有3个可能是新基因，它们与鼻咽癌的相关性有待于进一步的研究证实卜