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研究目的 通过观察肺呼吸力学、血气分析指标、支气管肺泡灌洗液中蛋白含量、细胞计数以及肺组织病理学的变化，明确实验性高碳酸血症对急性肺损伤（ALI）动物模型是否具有保护作用。通过检测核因子-κB（NF-κB）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的变化，观察高碳酸血症对ALI时炎症级联反应的影响。通过检测一氧化氮（NO）途径代谢产物的含量变化，观察高碳酸血症对NO依赖途径的影响，探讨高碳酸血症对油酸致ALI动物模型可能的作用机制，为指导临床ALI／ARDS患者的机械通气提供实验及理论依据。 材料与方法 1．材料 新西兰大白兔26只，体重2.5～3.0kg；混合气体（75％O2，25％N2混合气体；75％O2，8％CO2，17％N2混合气体）；Bear Cub 750呼吸机；AVLOMNI Ⅴ血气分析仪；RM 6000多导生理记录仪；TNF-α仅放免试剂盒；NF-κBp65亲和纯化兔抗体、即用型SABC试剂盒；NO及iNOS试剂盒；抗硝基酪氨酸单克隆抗体。 2．实验步骤 动物经20％乌拉坦（5ml／kg）腹腔麻醉后，气管切开插管连接呼吸机（Bear Cub 750），维库溴胺1mg静注以使肌肉松弛，辅助／控制模式通气，FiO275％，呼吸频率30次／分，吸气流速2.0L／min，吸气时间0.66s，呼气末正压（PEEP）1cmH2O，上述参数设置固定不变，调节吸气压，按7.5ml／kg维持潮气量（VT）。颈动脉插管监测动脉压、心率及采取血标本，颈静脉插管建立液体通道。基础状态稳定20min。满足下列条件的动物继续进行实验：PaO2＞300mmHg，PaCO230～40mmHg，HCO3-＞20mmol／L。随机分为对照组（C组），非高CO2通气组（N组）及高CO2通气组（H组）。分组后C组及N组给予75％O2，25％N2混合气体通气，H组给予75％O2，8％CO2，17%NZ混合气体通气。稳定巧而n后，N组和H组经颈静脉插管给予油酸0.lmFkg，分3次在20而n内注人;C组给予生理盐水0.lml/kg。采用Bear Cub 750呼吸机监测VT、气道峰压（PIP）及动态顺应性（Cd”），颈动脉插管经三通管与RM 6000多导生理记录仪相连，监测心率（HR）、动脉收缩压（BPSys）、动脉舒张压（BPdia），基础状态及给予油酸后每20而n记录一次，至给予油酸后3小时即实验结束时止;经颈动脉插管抽取动脉血标本，测定pH值、动脉血氧分压（PaO:）及动脉血二氧化碳分压（PaCO:），基础状态及给予油酸后每小时检测一次，至实验结束时止。 3.标本处理 基础状态采取血标本一70℃冻存。给予油酸后3小时，采取血标本-70℃冻存，放血将动物处死，立即从胸腔中取出心肺，对左下肺叶进行支气管肺泡灌洗，每次4nil，共3次，灌洗液经3层纱布过滤后计算回收量，取1滴回收液体进行细胞计数，剩余标本1200r/而n4℃离心10而n，留取上清液，一70℃冻存。左上肺叶灌注4%多聚甲醛并浸泡24小时以上，常规脱水、包埋制成蜡块，用于HE染色及免疫组化染色。右肺中叶取1小块核心部位组织，测湿重后，置60℃恒温箱，7天后再称千重，计算肺的湿重/干重比（W/D）。右肺下叶取1小块核心部位组织一70℃冻存。 4.测定方法 （1）BALF及血浆中蛋白含量的测定:采用双缩脉法。 （2）肺组织中髓过氧化物酶含量的测定:生化法。 （3）血清及BA甘中TNF一a含量的测定:采用放射免疫法，严格按照试剂盒说明书进行操作。 （4）肺组织病理学检查与NF一KB免疫组化检测:左上肺叶灌注4%多聚甲醛并浸泡24小时以上，常规脱水、包埋制成蜡块，连续切成4卜m切片，HE常规染色，进行肺组织病理学观察。免疫组化参照试剂盒说明书行ABC染色，一抗用NF一KB两5亲和纯化兔抗体，DAB显色，以PBS代替一抗作为阴性对照。随机选取5个高倍视野（x 400）计算胞核阳性的细胞数占细胞总数的百分比。取其平均值作为该切片的代表值。 （5）NF一KB在肺组织胞核中蛋白定量分析（Westem blot法）:胞核蛋白提取及蛋白定量后，取等蛋白量的各样品进行变性聚丙烯酞胺电泳，经一抗（l:500稀释）、二抗（碱性磷酸酶标记1，3的0）孵育后显色。显色的硝酸纤维素膜经GDs8000凝胶自动成像仪扫描成像，并通过图像分析仪（vZ .03分析软件）对显示的蛋白电泳带进行数据分析。 （6）iNOS活性及NO水平测定:参照试剂盒说明书进行，采用黄递酶法检测iNOS活性，硝酸还原酶法检测NO牙/NO至浓度代表NO水平。 （7）Westem blot法分析肺组织中硝基酪氨酸蛋白水平:蛋白提取及蛋白定量后，取等蛋白量的各样品进行聚丙烯酞胺电泳，经一抗（1:1000稀释）、二抗（碱性磷酸酶标记1:2000）孵育后显色。显色的硝酸纤维素膜经GDSS以刃凝胶自动成像仪扫描成像，并通过图像分析仪（V2.03分析软件）对显示的蛋白电泳带进行数据分析。 5.统计学分析 数据以又土s表示，应用SPSS 10.0统计软件。同组实验前后数据的比较采用酒己对t检验，多组均数比较采用方差分析，均数间的两两比较采用q检验。两因素之间的相关性分析采用直线相关分析。结果 4只动物在随机分组前被排除实验，其余22只动物（C组6只，N组8只，H组8只）至实验结束时均存活。 1.肺呼吸力学指标、血气分析指标、支气管肺泡灌洗液