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目的:通过建立血管瘤内皮细胞体外培养模型,利用不同浓度的熊果酸对体外培养的小鼠血管内皮瘤细胞(EOMA细胞)进行干预,动态观察小鼠血管内皮瘤细胞的生长、细胞增殖、凋亡以及血管内皮生长因子及其受体(VEGF、VEGFR-2)表达的影响情况,为寻找血管瘤新的治疗药物提供理论依据。方法:利用小鼠血管内皮瘤细胞(EOMA细胞)株进行体外细胞培养,将实验细胞分为B 1组(阴性对照组):添加0.1mlPBS溶液;B 2组:添加0.1ml 10mg/L熊果酸溶液;B 3组:添加0.1ml 20mg/L熊果酸溶液;B 4组(阳性对照组):添加0.1ml 10mg/L普萘洛尔。分别在处理后0h,24h,48h观察比较各组体外培养的EOMA细胞生长及凋亡的情况。采用HE染色检测细胞形态学改变;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术(Annexin V/PI染色法)测定细胞的凋亡情况;用ELISA试验方法检测VEGF及VEGFR-2的浓度。所测得的实验数据均使用统计学软件SPSS20.0描述与分析,定量资料采用均数及标准差表示,各个时间点上效应指标的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法重复测量资料的组间比较采用重复测量的方差分析,检验效能α=0.05,当P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果:1.HE染色观察细胞形态:在干预0h时,B2、B3、B4组与对照组B1相比较,无明显差异;在干预24h及48h后,B2、B3、B4与对照组B1相比较,细胞生长缓慢,稀疏,聚落生长不明显,以B3、B4组更甚。2.各组细胞增殖抑制情况:在0h的时候,b1、b2、b3、b4组的光密度值分别是:0.424±0.003、0.422±0.005、0.422±0.008、0.422±0.008,b2、b3、b4组的细胞抑制率为:0.43±0.16%、0.57±0.22%、0.57±0.23%。第24h时各组的光密度值分别是:0.665±0.013、0.621±0.004、0.560±0.024、0.577±0.031,b2、b3、b4组的细胞抑制率分别为:6.62±0.23%、15.71±0.50%、13.28±0.36%。第48h时各组的光密度值分别是:0.879±0.017、0.811±0.032、0.718±0.019、0.745±0.039。b2、b3组、b4组的细胞抑制率分别为:7.78±0.41%、18.31±0.31%、15.21±0.55%。统计分析显示,在第0h时各组的差异无统计学意义(p>0.05)。第24h及48h时,各组的差异具有统计学意义(p<0.05)且b2、b3、b4组光密度值均较b1组低,b3、b4较b2低,差异具有统计学意义(p<0.05);b3与b4的差异无统计学意义(p>0.05)。3.流式细胞术(annexinv/pi染色法)检测细胞凋亡率情况:在干预0h时,各细胞组凋亡率分别为:9.606±0.155%、9.828±0.185%、9.778±0.264%、9.746±0.168%。干预后24h,各组细胞凋亡率分别为:11.773±0.412%、14.158±0.408%、17.251±1.324%、17.626±0.466%。干预后48h各组细胞凋亡率分别为:11.390±1.584%、14.946±1.470%、19.886±1.319%、19.971±2.519%。统计分析显示,在第0h时各组的差异无统计学意义(p>0.05)。第24h及48h时,各组的差异具有统计学意义(p<0.05);且b2、b3、b4组细胞凋亡率均较b1组高,b3、b4较b2高,差异具有统计学意义(p<0.05);b3与b4的差异无统计学意义(p>0.05)。4.elisa检测vegf、vegfr-2浓度情况:在干预0h时,b1、b2、b3、b4组的vegf吸光度值分别是:1.963±0.009、1.957±0.011、1.951±0.007、1.941±0.042,vegf的浓度分别为168.717±0.914、168.096±1.106、167.511±0.741、166.560±4.141。vegfr-2的吸光度值分别是:1.510±0.012、1.506±0.014、1.494±0.020、1.518±0.013。vegfr-2的浓度分别为:2748.299±23.564、2740.891±27.786、2715.728±39.654、2764.186±25.257。在干预24h时,各组的vegf吸光度值分别是:1.952±0.005、1.666±0.008、1.285±0.013、1.264±0.168,vegf的浓度分别为167.659±0.460、139.303±0.788、101.583±1.326、99.519±16.672。vegfr-2的吸光度值分别是:1.492±0.012、1.183±0.012、0.998±0.017、0.989±0.006。vegfr-2的浓度分别为:2712.658±24.758、2093.773±24.508、1724.705±33.030、1705.893±11.665。在干预48h时,各组的vegf吸光度值分别是:1.956±0.007、1.385±0.009、1.187±0.013、1.239±0.153、vegf的浓度分别为168.031±0.716、111.472±0.918、91.905±1.243、97.006±15.155。vegfr-2的吸光度值分别是:1.485±0.020、0.879±0.018、0.707±0.016、0.688±0.020。vegfr-2的浓度分别为:2697.373±39.639、1486.890±36.745、1142.440±32.981、1104.255±41.955。统计分析显示,在第0h时各组的vegf、vegfr-2的差异无统计学意义(p>0.05)。第24h及48h时,各组的差异具有统计学意义(P<0.05);且B2、B3、B4组VEGF、VEGFR-2浓度均较B1组低,B3、B4较B2低,差异具有统计学意义(P<0.05);B3与B4的差异无统计学意义(P>0.05)。5.结果说明药物干预对体外培养的EOMA细胞具有抑制增殖、促进其凋亡、降低VEGF、VEGFR-2表达的作用,且在48h时比24h时作用更明显,而在相同时间点熊果酸20mg/L浓度比10mg/L浓度作用更明显(P<0.05),20mg/L熊果酸作用与10mg/L普萘洛尔接近(P>0.05)。结论:1.熊果酸对体外培养的EOMA细胞具有抑制生长、促进凋亡的作用。2.其对EOMA细胞的作用机制可能与其下调EOMA细胞的VEGF、VEGFR-2的表达水平有关。