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传染性支气管炎(infectious bronchitis, IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)引起的鸡的一种高度接触性的急性传染病,给全球养禽业带来巨大损失。目前对IBV分子生物学方面的研究较多,有必要对地方分离株的致病性、组织嗜性及感染后病毒在鸡体内的动态变化进行研究。生产中广泛使用的弱毒苗和灭活苗都无法完全控制IB,安全高效的新型疫苗成为当前研究热点,细胞因子作为重要的免疫调节物,其表达量常常被用于疫苗免疫效果的评价。课题首先建立了IBV的实时荧光定量PCR (qPCR)检测方法。建立的标准曲线相关系数R2=0.993、扩增效率为101.5%、溶解曲线单一整齐,特异性好；最低检测浓度为7.27×101copies/μL,灵敏度高；重复试验的变异系数为0.69%-2.51%,重复性好。其次,课题选择近年的4个IBV广西代表性分离株GX-YL11072(LX型)、GX-GL11079(LX型)、GX-NN1201(HN08型)和GX-NN09032(新型),通过点眼、滴鼻(105TOC-ID50/0.2ml/羽)分别对健康非免疫雏鸡各25羽攻毒,进行致病性的观察,于攻毒后1、3、7、14、21、28d分别采集气管、肺、肾脏、输卵管及盲肠扁桃体进行IBV的定量检测。结果表明,4个分离株都能引起雏鸡出现咳嗽、打喷嚏等呼吸道症状,潜伏期1-4d,发病率30%～100%,死亡率为0%～10%。其中GX-GL11079攻毒组的临床症状最为严重,解剖见肾脏肿大、输尿管尿酸盐沉积等病变,GX-NN09032攻毒组的气管观察到有黄色浓稠粘液；GX-NN1201、GX-YL11072和GX-GL11079组各器官的病毒载量大多在攻毒后3d达到峰值,GX-NN09032组在攻毒后7d各器官的病毒含量达到峰值,GX-GL11079攻毒组的病毒载量要高于其他3组；其中以气管的病毒载量最高且可持续到攻毒后21d,盲肠扁桃体携带病毒的持续时间最长,所有试验组均可持续至攻毒后28d。试验结果还显示4个毒株在鸡体内均都有广泛的组织嗜性。其三,课题还建立了IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12四种鸡细胞因子的相对定量PCR检测方法,扩增效率为98.8%-103.3%,而且特异性好、重复性强；对H120弱毒苗免疫后的雏鸡脾脏进行检测,结果显示,免疫后7dIFN-γ、IL-12基因的表达量最高(P<0.01),而IL-4、IL-10基因的表达量则在免疫后14d达到峰值(P<0.01),分别为对照组的9.3倍和3.1倍,至免疫后21d4个细胞因子基因的表达量与对照组的已没有显著差异。本课题的研究结果证明,建立的IBV qPCR检测方法具有特异、敏感的特点；4个IBV广西分离株都可导致雏鸡发病,且具有广泛组织嗜性,其中气管为主要的靶器官,GX-GL11079的致病性最强；建立的4种细胞因子qPCR检测方法可用于免疫后其在体内动态变化的检测。