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目的:通过研究比较补肾法与疏肝法对排卵障碍模型大鼠下丘脑神经递质影响的异同,探讨补肾法与疏肝法治疗排卵障碍性疾病的作用机理,以期丰富中医生殖理论,促进中医妇科学的发展。
方法:选用同批出生9日龄健康雌性SD大鼠204只,体重约15g。随机取170只大鼠参照俞瑾等[1]方法于颈背部皮下一次性注射丙酸睾丸酮1.25mg/只(0.05ml/只)造模。第22日龄断奶,自由进食。第70日龄阴道开口,造模组连续阴道上皮细胞涂片两个性周期(一个性周期4～5天),阴道上皮细胞持续角化提示雄激素致排卵障碍大鼠模型造模成功。其余34只大鼠于颈背部皮下一次性注射中性茶油0.05ml作为正常对照组。
选用3月龄健康雌性Wistar大鼠204只,体重180～250g。随机取170只大鼠造模,改进郑家润,梁文波等方法[2-3]。雷公藤多甙片30mg/kg/d(给药剂量为临床成人用量的20倍),灌胃法给药,连续57天。造模组连续阴道上皮细胞涂片两个性周期(一个性周期4～5天),动情周期转为不规则,主要为周期不完整及周期延长,提示雷公藤致排卵障碍大鼠模型造模成功。其余34只灌胃给蒸馏水作为正常对照组。
将雄激素、雷公藤致排卵障碍成模大鼠分别随机分为模型组和治疗组,治疗组包括:补肾调经方高剂量组(简称“补肾调经高组”)、补肾调经方低剂量组(简称“补肾调经低组”)、逍遥丸高剂量组(简称“逍遥丸高组”)、逍遥丸低剂量组(简称“逍遥丸低组”),每组分别各34只;治疗组分别灌服补肾调经方与逍遥丸,模型组和正常组灌服蒸馏水,每日1次。灌胃法给药5周,阴道细胞涂片两个性周期,最后一次给药后禁食8小时,选择相同动情周期(动情前期、动情后期)断头处死,无菌操作在冰盘上迅速开颅取下丘脑。下丘脑切取范围为:吻侧至前联合,尾侧至乳头体后部,外侧为下丘脑外侧沟,背侧至前联合水平高度。所取组织包括下丘脑底侧区,下丘脑前区和视前区。取出的下丘脑称重后,左侧加入1mL,1mol/L的乙酸(HAC),匀浆,4℃4000 r/min离心20min,取上清液加入1mol/L NaOH溶液1mL中和,投入液氮保存待测。右侧下丘脑置于液氮保存待测。采用放射免疫法测定β-EP,荧光分光分析法测定NE、DA、5-HT。
结果:
1.造模结果
1.1.雷公藤致排卵障碍大鼠模型与正常组动情前、后比较,模型组下丘脑神经递质β-EP、5-HT均升高(P＜0.05,P＜0.01),DA、NE均降低(均P＜0.01)。
1.2.雄激素致排卵障碍大鼠模型与正常组动情前、后比较,模型组下丘脑神经递质β-EP、5-HT均升高(P＜0.01,P＜0.01),DA、NE均降低(均P＜0.05)。
2.补肾法对两种模型大鼠神经递质的影响
2.1.雷公藤致排卵障碍模型与模型组比较,
①补肾调经低组动情前期β-EP明显降低(P＜0.05),但未降至正常水平(P＜0.05)。补肾调经低组动情后期β-EP明显降低(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05)。补肾调经高组动情前、后期β-EP明显降低(均P＜0.01),恢复至正常水平(均P＞0.05)。
②补肾调经低组动情前、后期NE明显升高(均P＜0.01),恢复至正常水平(均P＞0.05)。补肾调经高组动情前、后期NE明显升高(均P＜0.05),恢复至正常水平(均P＞0.05)。
③补肾调经低组大鼠动情前、后期DA明显升高,但未恢复至正常水平(均P＜0.05)。补肾调经高组动情前期DA明显升高(P＜0.01)恢复至正常水平(P＞0.05),动情后期也明显升高,但未恢复至正常水平(P＜0.01)。
④补肾调经低组动情前、后期5-HT明显降低(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05;P＞0.01)。补肾调经高组动情前、后期5-HT明显降低(均P＜0.01)但未恢复至正常水平,(均P＜0.01)。
2.2.雄激素致排卵障碍模型与模型组比较,
①补肾调经低组动隋前期β-EP降低(P＜0.05),但未降至正常水平(P＜0.01)。补肾调经高组动情前期β-EP明显降低(P＜0.05),恢复至正常水平(P＞0.05)。
②补肾调经低组动情前期NE明显升高(P＜0.05),未恢复至正常水平(P＜0.05)。补肾调经高组动情前期NE明显升高(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05)。
③补肾调经低组动情前、后期DA均未恢复至正常水平(均P＜0.05)。补肾调经高组动情前期DA明显升高,但未恢复至正常水平(P＜0.05);动情后期明显升高(P＜0.05)恢复至正常水平(P＞0.05)。
④补肾调经低组动情前、后期5-HT明显降低(P＜0.01;P＜0.05),恢复至正常水平(P＞0.05;P＞0.01)。补肾调经高组动情前、后期5-HT明显降低(P＜0.01)恢复至正常水平(均P＞0.05)。
3.疏肝法对两种模型大鼠神经递质的影响
3.1.雷公藤致排卵障碍模型与模型组比较,
①逍遥丸低组动情前、后期β-EP降低(均P＜0.01),但均未恢复至正常水平均P＜0.05)。逍遥丸高组动情前期β-EP降低(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05)。
②逍遥丸低组动情前期NE明显升高(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05)。逍遥丸高组动情后期NE明显升高(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05)。
③逍遥丸低组动情前、后期DA明显升高,但未恢复至正常水平(P＜0.05,P＜0.01)。逍遥丸高组动情后期DA明显升高(P＜0.01),恢复至正常水平(P＞0.05)。④逍遥丸低组动情前、后期5-HT明显降低(均P＜0.01),恢复至正常水平(均P＞0.05)。逍遥丸高组动情前、后期5-HT明显降低(均P＜0.01),恢复至正常水平(均P＞0.05)。
3.2.雄激素致排卵障碍模型与模型组比较,
①逍遥丸低组动情前期β-EP降低(P＜0.01),但未恢复至正常水平(P＜0.05)。逍遥丸高组动情前、后期β-EP明显降低(P＜0.01,P＜0.05),恢复至正常水平(均P＞0.05)。
②逍遥丸低组动情前、后期NE升高(P＜0.01,P＜0.05),恢复至正常水平(均P＞0.05)。
③逍遥丸低组动情前、后期DA明显升高,但均未恢复至正常水平(均P＜0.05)。逍遥丸高组动情前、后期DA明显升高但均未恢复至正常水平,(均P＜0.05)。
④逍遥丸低组动情前、后期5-HT明显降低(P＜0.01;P＜0.05),恢复至正常水平(均P＞0.05)。逍遥丸高组动情前、后期5-HT明显降低(均P＜0.01),恢复至正常水平(均P＞0.05)。
4.补肾法、疏肝法对两种模型大鼠下丘脑神经递质影响的比较
4.1.雷公藤致排卵障碍模型补肾调经低组动情后期β-EP低于逍遥丸低组(P＜0.05)。补肾调经高组动情后期β-EP低于逍遥丸高组(P＜0.05)。补肾调经高组动情前期NE水平高于逍遥丸高组(P＜0.05)。逍遥丸高、低组动情前、后期5-HT水平低于补肾调经高组(P＜0.05,P＜0.01;均P＜0.05)。补肾调经高组动情前期DA水平高于逍遥丸高组(P＜0.01)。逍遥丸高组动情后期DA水平高于补肾调经高组(P＜0.05)。
4.2.雄激素致排卵障碍模型组逍遥丸低组动情前期β-EP低于补肾调经低组(P＜0.05)。补肾调经高组动情前期NE水平高于逍遥丸高组(P＜0.05)。逍遥丸低组动情后期NE水平高于补肾调经低组(P＜0.05)。补肾调经高组动后DA水平高于逍遥丸高组(P＜0.05)。
结论:
(1)两种排卵障碍模型大鼠下丘脑神经递质均发生紊乱。
(2)补肾法、疏肝法通过调节神经递质水平,发挥调节性腺轴功能、治疗排卵障碍性疾病的作用。补肾法与疏肝法侧重调节的下丘脑神经递质有同有异。