肝移植术后胆道并发症已成为影响肝移植术后患者长期存活的重要因素。肝移植术后胆道并发症包括胆管结石、胆泥、胆管铸型综合征等。虽然胆管铸型物从理化性质上与胆管结石有所区别，但最终在胆道内也形成“结石”样物质，“成石”现象成为这两种肝移植术后胆道并发症的共同特点，因此在本研究中我们将肝移植术后并发胆管结石和铸型物视为有“成石”过程的一类胆道并发症。有许多证据表明胆汁内促成核因子—黏蛋白与胆结石的形成有关。黏蛋白分为两类，一类是与上皮细胞相连接的膜结合型黏蛋白，另一类是由上皮细胞分泌后直接进入管腔内的分泌型黏蛋白。黏蛋白呈丝网状排列，易于吸附胆红素、胆固醇、脱落细胞等成分，有利于它们的聚积并形成结石，这样黏蛋白在结石形成过程中起着桥梁和骨架样的作用。豆蔻酰化富丙氨酸激酶C底物(MARCKS)是蛋白激酶C主要的底物蛋白之一。已证实MARCKS是调控人呼吸道黏蛋白分泌的关键分子。具有将黏蛋白颗粒与收缩性的细胞骨架蛋白联接起来的作用，最终通过胞吐作用将黏蛋白颗粒分泌出细胞外。目前缺血—再灌注损伤仍然是原位肝移植术中无法回避的病理过程，供肝胆管作为对缺血—再灌注损伤敏感的靶器官，必然要承受热缺血、冷保存损害及后续的再灌注过程造成的多重打击，导致移植器官发生可逆性和不可逆性的损害。研究发现肝移植术后肝组织内肿瘤坏死因子-α、白细胞介素—2、6的表达均有增强，有大量证据表明多种炎性介质如肿瘤坏死因子-α、氧自由基与促进黏蛋白分泌有关。因此在本研究中重点关注了两个问题，首先是了解黏蛋白与肝移植术后胆管结石或铸型物形成间的关系，其次是观察肝移植冷保存时限和缺血—再灌注损伤对黏蛋白分泌的影响。本研究首先采用化学定量方法了解到临床肝移植术后胆管结石和铸型物的成分均以胆红素为主。经扫描电镜观察结石和铸型物标本，发现胆固醇性结晶和胆红素性颗粒堆积在以黏蛋白为主要成分的基质上。本研究采用免疫荧光方法在肝移植术后结石和铸型物冰冻切片标本中检测到有mucin1和mucin4的存在。另外应用Western blot和PCR技术从蛋白质翻译水平证实，肝移植术后并发胆管结石或胆管铸型综合征时，肝胆管系统合成与分泌的黏蛋白明显增多。因此，mucin1、4与肝移植术后的“成石”现象有关，推测黏蛋白可能在肝移植术后结石和铸型物的产生过程中扮演了重要角色。其次本研究建立的Wistar大鼠动脉重建和胆道外引流肝移植动物模型，无肝期时间平均为16.6±2.4min，手术成功率为94.67％，死亡率5.33％，且各袖套管内没有血栓形成，以上结果表明本方法具有稳定性高和重复性好的特点，是研究肝移植术后胆道并发症的理想动物模型。应用此模型观察了不同冷保存时限和术后不同时相点，对肝移植术后大鼠肝胆管系统黏蛋白分泌的影响并探讨可能的调控机制。研究结果表明大鼠肝移植术后胆汁内黏蛋白的浓度与冷保存时限和术后时间有关，在术后7d达到高峰，尤以CP12h组为最。免疫组织化学技术观察到肝移植术后大鼠肝胆管组织mucin1和mucin4蛋白呈阳性表达，变化趋势与胆汁内黏蛋白的改变一致。另外采用Western blot和荧光定量PCR技术分别检测了大鼠移植肝组织内mucin1、4蛋白和mucin1 mRNA的表达水平，结果显示蛋白和mRNA表达水平的变化与冷保存时限和术后时间有关。因此，冷保存时限和缺血—再灌注损伤是影响大鼠肝移植术后肝脏黏蛋白合成与分泌的重要因素。最后本研究通过免疫组织化学技术检测发现，肝移植术后并发胆管结石或铸型综合征患者以及肝移植术后大鼠肝组织内MARCKS蛋白表达均呈现明显升高，同时本研究还发现大鼠肝移植术后MARCKS蛋白的表达与肝移植术后黏蛋白的变化趋势是一致的，二者间的关系有待进一步的研究。总之，黏蛋白与肝移植术后胆道“成石”现象有关，肝移植冷保存和缺血—再灌注损伤诱导的MARCKS可能在此过程中起重要作用。