新疆维吾尔族和汉族冠心病差异lncRNAs表达谱的建立及其筛选验证

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目的:通过对新疆维吾尔族和汉族冠心病组与健康对照组进行lncRNA微阵列芯片结果分析,建立维、汉两民族冠心病病人lncRNAs表达谱;从lncRNA芯片结果中筛选具有差异表达的lncRNAs,临床验证其与芯片检测结果的一致性;细胞水平分别建立THP1泡沫细胞模型和HUVEC内皮损伤模型,观察差异lncRNAs的表达变化,通过转染lncRNAs siRNA初步探讨差异lncRNA在冠心病发生和发展中的作用机制。方法:根据纳入和排除标准,采用lncRNA基因芯片技术检测维、汉两民族冠心病组和健康对照组中lncRNA表达,分别对维、汉两民族lncRNA芯片结果进行基因芯片表达谱分析、信号通路分析及其靶基因预测结果分析;扩大样本量后,采用实时荧光定量PCR验证从芯片结果中筛选维、汉两民族抗凝外周血中差异lncRNAs的表达。采用两独立样本的t检验,用统计软件SPSS 18.0进行数据的统计处理。采用PMA+ox-LDL诱导THP1为泡沫细胞模型,采用ox-LDL诱导HUVEC为内皮损伤细胞模型,实时荧光定量PCR检测两种细胞诱导前后lncRNA的表达量变化;利用转染试剂将lncRNA siRNA转染至两种细胞,实时荧光定量PCR检测两种细胞转染前后lncRNA的表达量变化的水平。结果:通过对lncRNA基因芯片结果分析,建立了维吾尔族和汉族稳定型心绞痛和急性心肌梗死差异lncRNA表达谱,新疆维吾尔族SAP与健康对照组比较,上调表达的lncRNA共1871个,下调表达的lncRNA共231个;mRNA上调795个,下调554个。差异lncRNAs NR037652.1,ENST00000607654.1,ENST00000589524.1和uc004bhb.3验证结果与芯片检测结果一致。汉族SAP与健康对照组比较,上调表达的lncRNA共158个,下调表达的lncRNA共384个。上调表达mRNA共106个,下调表达mRNA共346个。差异lncRNAs ENST00000418539.1,ENST00000589524.1,NR027469.1和NR046226.1验证结果与芯片检测结果一致。新疆维吾尔族AMI与健康对照组比较,上调表达的lncRNA共3624个,下调表达的lncRNA共1637个。mRNA上调1833个,下调表达2063个。通过qRT-PCR方法验证维吾尔族AMI患者和维吾尔族健康志愿者之间差异的lncRNA ENST00000416860.2,ENST00000421157.1,TCONS00025701表达水平,验证结果与微阵列数据一致。汉族AMI与健康对照组比较,上调表达的lncRNA共2677个,下调表达的lncRNA共458个,上调表达的mRNA共1168个,下调表达的mRNA共1334个。通过qRT-PCR方法验证汉族AMI患者和健康志愿者之间差异的lncRNA ENST00000509938.1,ENST00000581794.1,NR047662.2,uc002ddj.1和uc002mev.3表达水平,验证结果与微阵列数据一致。细胞水平通过建立HUVEC内皮损伤模型和THP1泡沫细胞化模型,通过qRT-PCR方法验证了差异lncRNAs的表达。与THP1相比,泡沫细胞内lncRNA MAIT、MALAT1、uc002ddj.1和ENST00000509938.1表达上调,H19、ANRIL、NR-047662.2和ENST00000581794.1表达下调。与正常HUVEC相比,ox-LDL诱导后lncRNA MAIT、MALAT1、H19、uc002ddj.1和ENST00000581794.1表达下调,ANRIL、NR-047662.2和ENST00000509938.1表达上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在诱导分化同时分别加入lncRNA siRNA,转染24h后提取细胞RNA发现,与对照组相比,转染lncRNA MAIT、MALAT1 uc002ddj.1和ENST00000509938.1 siRNA组中lncRNA MAIT、MALAT1、uc002ddj.1和ENST00000509938.1 siRNA的表达量均明显降低,差异具有统计学意义。结论:通过对lncRNA基因芯片分析,建立维吾尔族和汉族冠心病稳定型心绞痛和急性心肌梗死的差异lncRNA表达谱;人群和细胞两水平验证差异表达的lncRNA与芯片检测结果基本一致,表明这些差异lncRNA可用作诊断冠心病心肌缺血损伤的生物标记物。
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