【摘 要】
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我国是水产养殖大国,也是水产病害大国。在淡水养殖中,草鱼呼肠孤病毒(GCRV)引起的草鱼出血病,具有高致死性及高传染性,是目前已知的造成全国淡水养殖总量最大的品种—草鱼,爆发性死亡的最主要病害之一,对淡水养殖产量产生巨大冲击。在海水养殖中,白斑综合征病毒(WSSV)引起的白斑综合征是虾类、蟹类乃至多种水生甲壳类动物养殖过程中危害最大的病害。表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG),一种绿茶中分离得到的
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我国是水产养殖大国,也是水产病害大国。在淡水养殖中,草鱼呼肠孤病毒（GCRV）引起的草鱼出血病,具有高致死性及高传染性,是目前已知的造成全国淡水养殖总量最大的品种—草鱼,爆发性死亡的最主要病害之一,对淡水养殖产量产生巨大冲击。在海水养殖中,白斑综合征病毒（WSSV）引起的白斑综合征是虾类、蟹类乃至多种水生甲壳类动物养殖过程中危害最大的病害。表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）,一种绿茶中分离得到的的酯型儿茶素单体,已被证明具有抑制GCRV以及WSSV的能力。通过药代动力学研究,我们发现EGCG在动物体内可以转化为同样具有抗病毒潜力的酯型儿茶素单体ECG。因此本研究在对两种酯型儿茶素单体（EGCG、ECG）使用安全性进行评估的同时,对其在水产动物病害防控方面的应用价值进行探究。并通过转录组测序分析,以EGCG为研究对象,较为系统的对酯型儿茶素单体抗水生动物病毒的分子机制进行解析。结论如下:1.EGCG在动物体内的代谢动力学研究通过对不同受试动物的药代动力学检测发现,EGCG在草鱼血浆、肝脏及肾脏的Cmax分别为103.667μg/m L、151.34μg/m L、2.12μg/m L,AUC（0-t）分别为836.777μg/（g·h）、1204.391μg/（g·h）、38.511μg/（g·h）;EGCG在克氏原螯虾肝脏、肌肉的Cmax分别为73.78μg/（g·h）、24.87μg/（g·h）。肝脏中EGCG含量为最高,我们推测EGCG的主要靶器官为肝脏。通过比对EGCG及其代谢产物ECG对应的AUC（0-t）数值计算ECG的转化率发现,草鱼血浆中ECG转化率(AUCECG/Plasma/AUCEGCG/Plasma)为6.98%;草鱼肝脏中ECG转化率(AUCECG/Liver/AUCEGCG/Liver)为7.90%;草鱼肾脏中ECG转化率(AUCECG/Kidney/AUCEGCG/Kidney)为73.24%。克氏原螯虾肝脏中ECG转化率(AUCECG/Plasma/AUCEGCG/Plasma)为15.04%;克氏原螯虾肌肉中ECG转化率(AUCECG/Liver/AUCEGCG/Liver)为12.78%。由此可见,EGCG在动物体内转化为ECG的代谢规律具有普遍性。2.EGCG的代谢产物ECG抗GCRV病毒感染研究以CIK细胞作为药物抗病毒能力评估模型,通过q RT-PCR技术对病毒滴度进行检测发现,ECG对GCRV感染的CIK细胞具有良好的保护效果,该药在20μg/m L对GCRV抑制率高于50%,在40μg/m L基本完全抑制GCRV的复制,与EGCG的抗病毒效果类似。3.EGCG抗WSSV病毒感染研究通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测发现,EGCG对WSSV感染的克氏原螯虾具有良好的保护效果,该药在10μg/（g·bw）基本完全抑制WSSV的复制。并且该药具有良好的安全性,通过病理组织观察发现EGCG,添加大剂量EGCG（40μg/g·bw）并未对组织细胞产生明显胁迫,进一步证实了EGCG在抗WSSV病毒应用方面的应用潜力。4.EGCG抗GCRV病毒感染转录组分析通过转录组测序分析发现,GCRV感染会引起宿主细胞免疫相关基因表达量的普遍上调,而EGCG处理组显著降低GCRV诱导的免疫反应;通过KEGG与GO富集分析,层粘连蛋白受体（Lam R）相关细胞功能及信号通路显著富集。因此,我们推测EGCG主要通过与宿主细胞膜Lam R受体特异性结合抑制GCRV入侵宿主细胞,从而实现对宿主免疫功能的间接调控。
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