5龄家蚕正常发育及其农药中毒后金属含量检测分析

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家蚕体内主要含有18种营养元素,这些元素在家蚕的新陈代谢,生长发育过程中起着重要作用,近些年来家蚕元素分析也渐渐受到人们的重视,尤其是重金属在家蚕体内的累积毒性方面。那么家蚕体内的元素含量彼此之间是否有明显差异?家蚕生长发育过程中,元素是否有规律性变化呢?本论文以家蚕C108品种作为实验材料,以微波消解作为样品前处理的主要手段,通过电感耦合等离子体质谱法测定家蚕体内主要组织的金属含量,这些研究有助于在金属组学方面进一步研究家蚕的生长发育和抗病性作用机制。本研究主要获得以下结果:1.初步建立家蚕中各金属元素检测方法:在样品前处理过程中通过对消解液加入量,消解时间,消解温度的优化,确定了样品前处理的基本条件,为后续的质谱检测做好充分的准备。在电感耦合等离子体质谱仪的样品检测方面,由于进样速率、仪器设置参数、碰撞气速率等诸多因素会对实验测定结果的准确性造成主要影响,所以本实验使用国家一级标准物质、加标回收率实验验证方法准确性,采用不同的检测模式减少样品组织和试剂中带来的杂质元素干扰。通过前处理条件优化和仪器参数的调节,准确测定了家蚕组织中23Na、24Mg、39K、44Ca、55Mn、56Fe、60Ni、65Cu、66Zn和85Rb中的含量,该方法具有操作简单,方便快捷,准确度高等优点,适合家蚕组织样品的多元素检测分析。2.5龄家蚕金属含量变化与家蚕的生理活动具有一定的关联性:5龄前期4种家蚕组织中K元素含量明显高于5龄其他生长阶段,尤其在脂肪体中十分明显,这与家蚕4龄眠起后需要大量营养物质和能量是分不开的,而K元素在5龄末期含量不同程度下降主要是5龄末期家蚕胞内渗透压降低,机体组织生理功能衰竭所致;同时Fe、Ni、Na元素含量在家蚕5龄时期具有相同的变化趋势,由此推测在家蚕物质转运、能量传递、酶活性调节和金属结合蛋白构象转变等生理功能中,多种元素之间存在互相促进,协同作用;Cu、Rb等其他元素含量变化也体现了家蚕生理功能与元素之间存在着潜在联系。3.家蚕添食农药后,与对照组相比,元素含量发生了明显差异:在溴虫腈中剂量处理组的家蚕丝腺、中肠、脂肪体中,Ca、K、Ni、Mg、Zn等元素含量高于低、高剂量组,血液样品中大部分元素含量在不同农药剂量处理组差别不明显,其中血液样品中K元素含量在低剂量下高于对照和其他添毒剂量组,这与该元素在丝腺、中肠和脂肪体中的分布明显不同;在辛硫磷实验组,Ni元素的含量添食农药后普遍低于对照组,可能是家蚕中毒后体内酶活力降低所致;Rb含量虽然也低于对照组,但随着添毒剂量增加,Rb含量却呈上升趋势,这与辛硫磷中毒后,家蚕体内乙酰胆碱酯酶受到抑制,乙酰胆碱累积,导致家蚕神经活力增强有关;在氯氰菊酯实验组中,家蚕染毒后,Na离子含量在高剂量组下明显高于低、中剂量组和对照组,Fe离子含量对照组含量普遍高于添毒实验组,推测家蚕在氯氰菊酯作用下,体内内环境稳态发生明显变化,血淋巴中相关蛋白功能受损。
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