中药积雪草是伞形科植物积雪草[Centella asiatica（L.）Urban]的干燥全草，为各版《中国药典》收藏品种，主要含有三萜皂苷类成分，被认为是一种具有治疗各种热症、痈疽、瘰疬等功效的药物。积雪草苷（asiaticoside，AC）及羟基积雪草苷（madecassoside，MC）是积雪草三萜皂苷类的主要成分。本实验室在前期的研究中通过体外药物筛选实验首次发现AC和MC这两种化合物可有效保护大鼠原代心肌细胞缺氧复氧损伤，同时具有保护血管内皮细胞的作用，通过离体动脉条实验还证明积雪草苷类化合物具有扩张小动脉的作用，实验结果表明AC和MC化合物可能具心血管活性。本研究利用离体、整体动物急性心肌缺血及心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI）模型，以心功能、血清酶活性、心肌梗塞面积等为指标，深入研究AC及MC对心肌缺血预防和治疗作用，再根据实验中发现的药物作用特点进一步研究其在细胞、分子水平的作用机制。1．积雪草苷抗心肌缺血活性及其可能机制制备大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型，AC预处理后，记录不同时间点冠脉流量和心肌收缩力，用定量组织化学染色方法计算心肌梗死面积；预先给予AC，制备急性心肌缺血病理模型，计算心肌梗死面积，检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、天门冬氨酸转移酶（AST）、超氧化物岐化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）含量；在预防给药情况下，制备在体兔心肌缺血再灌注损伤模型，采用生理多导仪检测心率（HR）、血压（BP）、心功能等血流动力学指标，检测血清中LDH、CK活性，ELISA法测定血清中C反应蛋白（CRP）含量，TUNEL法检测心肌细胞凋亡。研究结果显示AC可明显减小左心及全心心肌梗死面积，具有剂量依赖性，能明显改善心功能，作用特点在于对血压和心率无影响。在进行相关机理研究中发现，AC可降低心肌缺血所致的MDA含量升高程度，升高SOD活性，具有清除血清中氧自由基作用；AC可降低心肌缺血再灌注损伤所致的CRP升高程度，可能具有抗炎活性，从而降低心肌缺血损伤程度；AC可明显减少心肌细胞凋亡，可能具有抗凋亡活性。2．羟基积雪草苷抗心肌缺血再灌注损伤活性及其可能机制制备大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型，MC预处理后，记录不同时间点冠脉流量和心肌收缩力，用定量组织化学染色方法计算心肌梗死面积；制备兔心肌缺血再灌注损伤（MIRI）模型，缺血前静脉滴注MC，多时间点检测心电图、血流动力学等指标，用定量组织化学染色方法计算心肌梗死面积，检测血清中酶活性及MDA含量，ELISA法测定血清中C反应蛋白（CRP）含量，TUNEL法检测心肌细胞凋亡，SP法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达；在此模型基础上，改变给药时间窗，再灌注时静脉滴注MC，多时间点检测心电图、血流动力学等指标，用定量组织化学染色方法计算心肌梗死面积，检测血清中酶活性及MDA含量，考察MC对缺血再灌注损伤的治疗作用；制备大鼠缺血再灌注所致心率失常模型，采用生理多导仪记录心电图，记录首次心率失常发生的时间及再灌注至心电图恢复正常所持续时间；制备原代心肌细胞缺氧/复氧模型，预先给予MC，采用荧光探针法检测心肌细胞内Ca²⁺浓度、活性氧（ROS）水平，采用荧光素酶报告基因法检测心肌细胞内ATP含量。研究结果显示MC在药效学上可明显减小左心及全心心肌梗死面积，具有一定量效关系；对相关的血清酶学指标和心电图有一定的改善作用；并能明显改善心功能，降低平均动脉压，且对心率无影响；再灌注时给予MC，明显抑制血清中CK和LDH的升高，改善心功能，且作用时间长于维拉帕米、作用强度优于香丹注射液，对心肌缺血再灌注损伤有一定的治疗作用；MC能明显缩短再灌后心电图异常持续时间，且在一定剂量上能明显延迟首次发生时间，对缺血再灌注所致心律失常具有一定的抑制作用。机制研究表明，MC可降低血清MDA含量，升高SOD活性，能抑制脂质过氧化过程，可降低原代心肌细胞缺氧/复氧所致胞内ROS升高水平，证明MC具有抗氧化活性，减轻自由基损伤；MC可降低血清中CRP升高程度，具有抗炎作用；MC可通过上调Bcl-2蛋白表达、抑制胞内ATP水平降低、减小心肌细胞内钙超载从而抑制心肌细胞凋亡。MC对心肌缺血再灌注损伤的保护作用具有多靶向性，具有抗炎及抗氧化活性，最终通过多途径抑制心肌细胞凋亡的发生而发挥保护作用。