瘦肉精莱克多巴胺是对人体危害极大的非法畜牧养殖添加剂,如果人误食了含有莱克多巴胺的肉制品,其身体健康会受到严重损害,所以对莱克多巴胺进行快速现场检测对从源头把控肉制品产品的安全具有重要意义。因此,本文建立了莱克多巴胺的三种免疫侧向层析快速检测方法:(1)传统型免疫侧向层析试纸瘦肉精莱克多巴胺检测方法的建立本方法是基于免疫识别原理和侧向层析实验原理对莱克多巴胺进行试纸检测,在金纳米粒子表面标记莱克多巴胺单克隆抗体,T线固定莱克多巴胺抗原,C线固定羊抗鼠二抗,肉眼通过观察T线和C线是否显现定性分析莱克多巴胺的存在状况,结合扫描线条灰度进行莱克多巴胺定量分析。本实验对偶联抗体量、偶联时碳酸钾添加量、封闭剂种类和金标垫滴加体积关键实验参数进行优化,在最优实验条件下,对莱克多巴胺的检测在10 min内完成,裸眼观察的灵敏度为0.5 ppb,标准曲线检测线性范围为0.05-2 ppb。本方法同样适用于检测动物尿液中的莱克多巴胺含量,检测结果与标准品检测结果高度一致,不受基质效应干扰。(2)增敏型免疫侧向层析试纸瘦肉精莱克多巴胺检测方法的建立本方法是在传统免疫侧向层析试纸检测的基础上增加一个增敏金标垫,增敏垫上为羊抗鼠二抗与金纳米粒子偶联物,利用羊抗鼠二抗对金纳米粒子的莱克多巴胺抗体二次识别作用增强T线显色和变化强度使检测灵敏度得到显著提高。本实验对增敏抗体偶联量、样品垫处理液成分、封闭物和金纳米粒子直径进行优化,确定最佳实验参数。在最优实验条件下,对莱克多巴胺的检测在10 min内完成,裸眼观察灵敏度为0.05 ppb,相比于传统方法提高了10倍。标准曲线线性范围为0.005-0.2 ppb。本方法同样适用于检测动物尿液中的莱克多巴胺含量,检测结果与标准品检测结果高度一致。(3)多壁碳纳米管标记免疫侧向试纸瘦肉精莱克多巴胺检测方法的建立本方法是基于竞争法免疫侧向层析试纸检测原理,用多壁碳纳米管标记莱克多巴胺单克隆抗体建立免疫侧向层析试纸,对莱克多巴胺进行快速检测。多壁碳纳米管具有比表面积大、表面化学性质可控等优点,但是由于其分散性差和体积大,在侧向层析领域的应用较为薄弱。本方法在多壁碳纳米管表面标记莱克多巴胺单克隆抗体,T线固定莱克多巴胺抗原,C线固定羊抗鼠二抗,肉眼通过观察T线和C线是否显现定性分析莱克多巴胺的存在状况,结合扫描线条灰度进行莱克多巴胺定量分析。本实验对多壁碳纳米管的前处理方法、偶联抗体体积、封闭剂种类、重悬液中聚乙二醇浓度和重悬液体积进行优化,确定了最佳实验参数。在最优实验条件下,对莱克多巴胺的检测在10 min内完成,裸眼观察的灵敏度为0.5 ppb,标准曲线的线性检测范围为0.05-2 ppb。本方法同样适用于检测动物尿液中的莱克多巴胺含量,检测结果与标准品检测结果一致,不受基质干扰。所以利用多壁碳纳米管进行标记建立的免疫侧向层析试纸检测的灵敏度不输于传统金纳米粒子标记,为下一步多壁碳纳米管在免疫侧向层析试纸上的深度应用奠定基础。