论文部分内容阅读
目的:筛选获得结核患者血清IgG抗体的特异性适体,研究结核患者IgG抗体适体组合及适体与抗原组合在结核病血清学检测中的应用价值。方法:纯化结核患者血清中的IgG抗体,以IgG抗体为靶标,利用SELEX技术进行筛选,筛选得到的ssDNA适体文库,进行克隆测序、亲和性检测、二级构象分析,鉴定单独适体、两适体组合及适体和抗原组合的检测效果,均进行了88份血清标本的分析,然后将适体组合与抗原初步组合进行221份血清标本的分析。结果:纯化获得了IgG抗体,浓度为1.8mg/ml。SELEX筛选12轮后,随机挑选12个适体进行二级结构分析和亲和性检测。二级构象分析揭示,适体与靶分子的结合基础为口袋颈环鼓包结构和分枝的连接角度。SELEX筛选得到4个较高亲和性适体。单适体88份血清学检测结果显示,适体之间存在交叉互补性。适体两两组合88份血清学检测效果显示,N1+N6组合的叠加作用较好且阳性平均值与阴性平均值的比值(P/N)较高。N6适体、16KD抗原以及N6+16KD(1:1比例组合)3种检测方法,88份血清标本检测的特异性均为100%,敏感性分别为:47.92%、56.25%、64.58%,非参数检验显示,3种检测体系的结核病组和健康对照组之间差异均具有统计学意义(P均<0.05),卡方检验三种检测方法之间差异无统计学意义(P>0.05)。选择适体之间叠加作用较好且P/N值较高的N1+N6与16KD抗原的初步组合,221份血清标本检测结果显示了相同的结果,即卡方检验三种检测方法之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:SELEX技术筛选获得的特异性IgG抗体适体具有良好的结核病血清学诊断价值,可用于结核病的实验室诊断,虽然适体与抗原检测存在交叉互补性,组合检测敏感性有所提高,说明适体和抗原组合这种检测方法是可行的,但是适体检测、抗原检测及适体和抗原组合检测的检测效果差异不显著。