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目的本研究运用蛋白组学技术鉴定不同证候食管鳞癌组织、癌旁组织和正常食管粘膜组织差异表达蛋白质,寻找食管癌不同阶段和不同证候相关表达蛋白,探讨食管鳞癌的癌变机理和食管鳞癌证候发生分子病机。 方法按照标准收集痰气交阻型( P)、瘀血内结型( B)、津亏热结型( F)和气虚阳微型( Q)四种中医证型食管癌患者病例样品,采用双向凝胶电泳(2-DE)技术电泳分离患者癌组织、癌旁组织与正常食管组织组织蛋白,利用 ImageMaster 2D Platinum 软件对凝胶图像进行蛋白点的寻点、定量和匹配及统计分析,在此我们认定百分比灰度(%Volume)大于 2 倍且具有重复性的蛋白点是差异蛋白点。蛋白样品用 4700 串联飞行时间质谱仪[4700 Proteomics Analyzer (TOF/TOFTM) (Applied Biosystems , USA)]进行质谱分析,所得结果用 GPS(Applied Biosystems, USA) –MASCOT (Matrix Science, London, UK)进行数据库检索。 结果1 进一步改进食管癌组织蛋白质样品的提取制备技术方法,获得了图像清晰、重复性较好的不同证型食管癌正常组织、癌旁组织与正常组织双向凝胶电泳图像 12 张,为鉴定分析食管癌发生相关联蛋白奠定前期基础。 2 从食管癌癌组织、癌旁组织和正常组织之间筛选出差异蛋白 44 个2 9 种,其中癌组织与癌旁组织差异蛋白 1 3 个,1 0 个上升表达,3 个表达下降;癌组织与正常粘膜差异蛋白 14 个,其中 7 个上升表达, 7 个表达下降;癌旁组织与正常组织比较发现差异蛋白 17 个,其中 8 个上升表达, 9 个表达下降。 3 不同证型食管癌组织之间:P 组与 B 组,P组癌组织中蛋白表达上调 2 种,未发现下调蛋白;癌旁组织中表达上调蛋白 2 种,下调 6 种;正常组织中表达上调蛋白1种,下调 4 种。P 组与F组比较,P组表达上调蛋白 3 种,下调蛋白 2 种;癌旁组织中表达上调蛋白1种,下调12种;正常组织中表达上调蛋白1种,下调 8 种。P 组与 Q 组比较,P 组癌组织表达上调蛋白1种,下调蛋白 6 种;癌旁组织中表达上调蛋白 1 种,下调 12 种;正常组织中表达上调蛋白 1 种,下调 8 种。B组与F组比较,B组癌组织表达上调蛋白 2 种,下调蛋白 2 种;癌旁组织中表达上调蛋白 1 种,下调 4 种;上调蛋白 1 种,下调 4 种。B 组与 Q 组比较,B组癌组织中表达上调蛋白 2 种,下调蛋白 2 种;癌旁组织中下调蛋白有 4种,未发现上调蛋白;正常组织中上调蛋白 1 种,下调 8 种。F 组与 Q 组比较,F 组癌组织表达上调蛋白 1 种,下调蛋白 6 种;癌旁组织中下调蛋白 2 种,上调蛋白 2 种;正常组织中表达上调蛋白 3 种,下调 2 种。 4 对食管癌不同阶段筛选出的蛋白进行信号通路分析,筛选出的主要 信 号 通 路 为 Hypertrophic cardiomyopathy (HCM) 、 Dilated cardiomyopathy phath way、和 Vascular smooth muscle contraction Pathway 通路相关,另外,对存在的差异蛋白进行 GO 富集分析,将其分子功能、生物过程进行研究,选取 p-value 小于 0.05 为有意义的目标,发现不同证型食管癌各自主要与细胞骨架结构、蛋白磷酸化、乙酰化氨基结束、钙结合调节等功能相关 结论1 食管癌不同阶段有差异表达蛋白。主要涉及到激活蛋白激酶 C 通路( PKC)-肌球蛋白磷酸酶抑制剂参与通路、活化 T 细胞因子通路、细胞粘附信号通路、钙调蛋白( CAM )核因子活化的 T 细胞信号传导等通路。 2 不同证候食管癌组织有差异表达蛋。其信号传导通路主要涉及血管平滑肌收缩通路、肥厚型心肌病( HCM)通路等信号传导通路;能够初步证明蛋白表达与证型的相关性。痰气交阻证型组中蛋白表达主要与细胞骨架功能、细胞凋亡、蛋白磷酸化等相关;瘀血内结型蛋白功能主要参与钙调节、蛋白加工、抗原递呈等;津亏热结型蛋白功能主体体现在细胞分化、迁移、蛋白转录等方面;气虚阳微证型主要反映在结构蛋白表达下降,与肿瘤晚期人体生理机能下降衰弱相应。