论文部分内容阅读
目的高迁移率族蛋白(HMGB1)作为炎症反应因子,在败血症、关节炎等疾病中都发挥促炎作用。最近研究发现,HMGB1在多种肿瘤中高表达,对肿瘤的生长、迁移、侵袭发挥重要作用。本研究探讨高迁移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血浆中的表达情况及与临床治疗的关系,通过RNA干扰抑制探讨HMGB1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,观察高迁移率族蛋白(HMGB1)对肿瘤血管生成的体外调节作用。方法1.通过ELISA方法分别检测105例卵巢癌患者治疗前及临床缓解期,46例卵巢良性疾病患者,33例健康女性血浆中HMGB1表达水平,研究高迁移率族蛋白(HMGB1)在上皮性卵巢癌、卵巢良性疾病及健康人血清中的表达情况及与临床治疗的关系。2.靶向HMGB1基因的慢病毒载体转染卵巢癌细胞SKOV3、A2780,荧光显微镜观察转染效果。3.利用real-time RT-PCR和Western blot方法检测卵巢癌细胞中HNGB1mRNA及蛋白的沉默效果。4.CCK8法检测细胞增殖情况,HMGB1沉默后卵巢癌细胞增殖能力的变化。5. Transwell小室模型检测HMGB1沉默后卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的改变。6.通过CCK8检测不同浓度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs细胞的体外增殖能力。7.通过Transwell、室模型实验检测不同浓度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs细胞的体外迁移能力。8.成管实验检测不同浓度hrHMGB1和hrVEGF-C刺激下HUVECs细胞的体外成管能力。结果1.卵巢癌组HMGB1水平明显高于良性肿瘤组与健康组(P<0.01), HMGB1水平与卵巢癌疾病分期相关,卵巢癌患者治疗后血浆HMGB1明显下降(P<0.01)。2. ShRNA沉默HMGB1的表达可以降低卵巢癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力。3. HMGB1可以在体外促进血管内皮细胞的增殖、迁移、成管能力,且其促进作用呈剂量依赖关系。作为阳性对照的VEGF-C有明显促血管生成的作用。结论1.卵巢癌患者血浆HMGB1水平较良性患者及健康人高,并随疾病分期的升高而升高,卵巢癌患者治疗缓解后血浆HMGB1下降,可以推测HMGB1与卵巢癌发生发展密切相关,血浆HMGB1的检测有希望成为卵巢癌诊断监测的新方法。2.沉默HMGB1基因后可显著抑制卵巢癌细胞体外增殖、侵袭和迁移能力,提不HMGB1可作为卵巢癌基因治疗的有效靶点并且ShRNA可能为卵巢癌基因治疗开辟新思路。3. HMGB1和VEGF-C均为血管生成因子,可以促进血管生成和肿瘤血道转移,有望成为肿瘤治疗中抑制转移的新方向。