论文部分内容阅读
本研究采用半叶枯斑法和叶盘法对56科108种植物的乙醇提取物的抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)活性进行了测定。结果表明:提取物浓度为10mg/mL时,约2/3的植物乙醇提取物对TMV的侵染有一定的抑制作用,抑制率达50%以上的占48.1%,而对TMV增殖具有抑制作用的植物提取物却很少,108种植物中仅6种植物的乙醇提取物对TMV增殖有明显的抑制作用;乙醇提取物经氯仿和正丁醇萃取后,对TMV侵染具有抑制作用的成分大多数分布在正丁醇萃取层中。
1.采用活性跟踪法对金鸡菊(Coreopsis drummondii)和小白菊(Partheniumhysterophorus)2种植物中的抗病毒活性成分进行了提取、分离及结构鉴定。从金鸡菊根中分离出A<,1>、A<,2>、A<,3>、A<,4>和A<,5> 5种化合物,从小白菊中分离出B<,1>和B<,2> 2种化合物,其中A<,1>为首次从金鸡菊中分离获得。结构测定结果表明,A<,1>为1-苯基-1,3,5-三庚炔(1-phenyl-1,3,5-triheptalkyne),A<,2>为(7E,8Z)-1,2,4-trihydroxy-1-(3-hydroxy-1-butenyl)-2,6,6-trimethycyclohexene,A<,3>为β-豆甾醇(β-stigmasterol),A<,4>为豆甾醇(Stigmaster01),A<,5>为β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(β-sitosterob3-O-β-D-glucopyranoside),B<,1>为小白菊内酯(Parthenolide), B<,2>为Vomifoliol;生物活性测定结果表明,A<,1>、B<,1>不仅对TMV侵染具有抑制作用,而且还可以明显抑制TMV的增殖,浓度在0.2 mg/mL下,化合物A<,1>、B<,1>对TMV侵染引起的枯斑抑制率分别为81.3%和72.1%,对烟草叶圆盘中的TMV增殖的抑制率分别可达84.3%和72.3%。
2.对两种活性物质的抗病毒机制进行了探讨。电镜观察、透析处理和间接酶联免疫检测(ELISA)等试验结果表明,化合物A<,1>、B<,1>对TMV粒体的外部形态结构和外壳蛋白的抗原位点均无明显的破坏作用,但可明显影响病毒外壳蛋白的体外聚合过程,且对TMV核酸的侵染力也表现出较高的体外抑制活性;实时荧光定量PCR检测结果表明,两种化合物均可明显抑制烟草叶片中TMV的复制酶基因(TMV-RdRp)和外壳蛋白基因(TMV-CP)的表达,在0.2 mg/mL下,A<,1>处理的烟草中TMV的复制酶基因(TMV-RdRp)和外壳蛋白基因(TMV-CP)的表达水平分别约是对照的25.7%和20.2%,B<,1>处理的烟草中TMV的复制酶基因(TMV-RdRp)和外壳蛋白基因(TMV-CP)的表达水平分别约是对照37.3%和23.1%。
3.选择对TMV的侵染或增殖具有良好抑制效果的3种植物提取物,分别以对TMV侵染和增殖的抑制效果为考察指标,采用正交试验研究了3种植物提取物混配的最佳配比,结果表明,对TMV侵染抑制作用效果最好的配比为:鸦胆子提取物1.0 mg/mL、金鸡菊提取物0.8 mg/mL和淫羊藿1.2 mg/mL,3种提取物按该配比进行混配的混合物对TMV的侵染具有强烈的抑制作用,其抑制率可达99.6%;对TMV增殖抑制作用效果最好的配比为:鸦胆子提取物1.0 mg/mL、金鸡菊提取物0.5mg/mL和淫羊藿0.8mg/mL,按该配比进行混配的混合物能显著抑制烟草叶圆盘中TMV的增殖,其抑制率为89.6%。此外,还对混配提取物微乳剂(ME)的加工进行了初步研究,确定了10%混配提取物微乳剂的配方(质量百分比)为:混配提取物lO%,DBS-Ca 5%,农乳60315%,甲醇25%,水45%。接种TMV的烟草于接种病毒前、后分别喷施混配提取物,其接种叶内TMV的浓度明显低于不喷药物的对照烟草;盆栽防治结果表明,喷施100倍的10%混配提取物微乳剂对烟草花叶病的相对防效为45.6%;本研究还测定了普通烟草喷施混配提取物后,其叶片内一些与抗性相关的酶活性及叶绿素含量的变化情况。
结果表明,烟草喷施混配提取物后,其体内多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性和叶绿素a、叶绿素b的含量及叶绿素总量均有不同程度的提高,说明混配提取物可在一定程度上增强烟草对TMV的抵抗能力。