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目的利用HBx逆转录病毒感染小鼠肝前体细胞HP14.5，构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）的小鼠肝前体细胞株。检测HBx对小鼠肝前体细胞增殖、细胞周期、上皮-间质转化，以及wnt/β-catenin信号通路的影响，探讨探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)相关性原发性性肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）的发生机制。方法重组质粒pSEB-Flag-HBX与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞，包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒，并感染小鼠肝前体细胞HP14.5，稻瘟菌素（Blasticidin）筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养（HP14.5/HBx组），通过RT-PCR和Western blot法鉴定HBx在肝前体细胞中稳定表达，设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组。观察其形态变化，MTS比色法检测各组细胞的增殖活力，FCM法检测细胞周期中各时相所占的比例，通过实时定量PCR检测CyclinD1mRNA、 c-myc mRNA的表达量，Western blot法检测GSK3β、p-GSK3β（ser-9）、β-catenin、Cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达情况，同时实时定量PCR检测及Western blot检测其间质细胞标志物N-cadherin、Snail、Vimentin和上皮标志物E-cadherin、CK18在mRNA和蛋白水平的表达，并采用划痕实验检测其迁移能力的变化。结果经抗生素筛选得到抗性细胞，通过RT-PCR和western bolt检测到HBx基因和蛋白阳性表达。与对照组相比：1、HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加（p<0.05）； G1细胞比例明显减少（p<0.05），S期和G2细胞比例明显升高（p<0.05）；Cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高（p<0.05）； GSK3β蛋白水平表达无明显变化（p>0.05），p-GSK3β、β-catenin、Cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高（p>0.05）。2、稳定表达HBx基因后肝前体细胞由多角形变为长梭行；在HP14.5/HBx细胞中间质标志物N-cadherin、Snail、Vimentin在mRNA和蛋白水平表达均升高，具有统计学差异（p<0.05）而E-cadherin、CK18的mRNA和蛋白表达量显著降低（p<0.05），同时其迁移能力显著升高（p<0.05）。结论1.成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株HP14.5/HBx。2. HBx通过活化wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖。3、HBx能诱导肝前体细胞发生上皮-间质转化,并增强其迁移能力。