猪细小病毒病是由猪细小病毒引起的以初产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔为特征的繁殖障碍性疾病。该病广泛存在于世界各地并在大多数猪场流行,严重地影响着养猪业的发展,因此一直是猪病研究的热点之一。本研究首先建立了用于检测猪细小病毒感染的PCR方法,并使用细胞培养技术在临床病料中分离了一株猪细小病毒,在此基础上利用PCR技术扩增了猪细小病毒的VP2基因主要抗原决定区序列并与其他国内外13个细小病毒基因组进行了比较和分析,为下一步进行原核表达、真核表达以及基因工程疫苗免疫预防应用打下了基础。根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了一对寡核苷酸引物,通过PCR扩增成功地从猪细小病毒感染的胎儿和细胞中扩增出1124bp片段,回收该片段用HindⅢ酶切得到了预期的结果,以PPV细胞毒、PCV2、PRRSV、PRV及临床病料为模板,结果只有PPV细胞毒和部分疑似病料扩增出目的条带。将PPV RFDNA模板进行10-6稀释后依然可以检出说明该方法敏感性很好。利用该方法对临床上32份流产病料的检测,检出阳性6份,而同时利用HA检测阳性只有4份。这些结果说明本研究建立的PCR诊断方法具有灵敏度高、特异性强的特点。利用本方法检测到的阳性病料进行初步分离鉴定,发现该分离病毒在PK-15细胞上连续盲传4代,可致PK-15细胞出现聚堆、拉网、形成空斑等典型病变;琼扩试验可见明显的沉淀线;间接免疫荧光阳性;应用本课题已建立的猪细小病毒的PCR诊断方法,以提取的病毒DNA作为模板,扩增出特异性的目的片段。上述结果证明,所分离到的病毒为猪细小病毒,并将其暂命名为PPV ZK株。PCR反应扩增了包含猪细小病毒VP2主要抗原表位基因DNA片段,并进行了克隆和测序.将该序列在GenBank上利用DNA Blast软件和DNAstar软件和其他国内外分离株进行比较,发现该株病毒与GenBank登录的PPV-VP2基因组的核苷酸和氨基酸同源性均达到97%以上,证明了PPV VP2基因序列是十分保守的,但从序列进化树上仍可以看出地域差异,与大部分国内序列在一个分支上而与德国分离株关系较远。氨基酸序列分析结果表明该片段编码352个氨基酸,具有14个潜在的抗原位点均匀分布,而且疏水性区域和亲水性区域分布也都比较均匀,这一结果预示着PPV-ZK株VP2基因可以应用于免疫预防的良好前景。本研究中PPV PCR检测方法的建立解决了PPV隐性感染和早期感染以及传代细胞系污染不易检测的难题,对猪细小病毒病的临床诊断、控制以及生物制品的生产等均具有重要意义。对VP2结构蛋白基因的克隆、序列测定与分析以及氨基酸序列分析和蛋白质一级结构的预测为进一步研究细小病毒的免疫诊断、分子流行病学、免疫预防以及更进一步的分子生物学研究打下了坚实的基础。