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目的:阿尔茨海默病(Alzheimer Disease,AD)是一种多病因神经变性类疾病,临床主要表现为记忆力障碍、分析判断能力衰退、情绪改变、行为异常乃至意识障碍等进行性精神状态衰变,是老年人的常见病。目前已有研究发现,AD时侧脑室室下区与海马等部位存在有神经生发功能的改变。第四脑室外侧隐窝位于第四脑室底与蛛网膜下腔之间,是脑脊液循环的特殊位置。本研究选用快速老化小鼠(SAMP8小鼠),采用SOX2、Nestin、和BrdU免疫组化染色和免疫组化荧光染色的方法检测及鉴定其第四脑室外侧隐窝区是否存在神经干细胞或神经前体细胞,并对其形态学及分布情况进行观察、分析。 方法:选取SAMP8小鼠3只和SAMR1小鼠3只,经腹腔注射BrdU生理盐水注射液制成BrdU模型鼠。然后分别对9只SAMP8小鼠和9只SAMR1小鼠在第四脑室外侧隐窝区切取多个组织块,并制成石蜡切片和冰冻切片,应用SOX2免疫组化染色、Nestin免疫组化染色、BrdU免疫组化方法和SOX2、Nestin免疫荧光组织化学双标方法研究外侧隐窝区的脑组织,显微镜观察、照相,对阳性表达细胞的形态学特征进行描述,对其分布做统计学分析。 结果: 1外侧隐窝免疫组化染色 1.1 SOX2免疫组化染色:对照组阳性表达细胞在室管膜腹侧区分布较密集;背侧区入口处染色呈浅棕色弱阳性表达,分布较腹侧区稀疏,高倍镜下示细胞胞体较小;实验组SOX2阳性表达细胞在外侧隐窝的背侧区和腹侧区分布密集,均呈强阳性表达。高倍镜下见阳性细胞在背侧区细胞胞体较大。脉络丛根部SOX2阳性细胞呈团状密集表达;入口处部分室管膜细胞为双层排列。 1.2 Nestin免疫组化染色:对照组室管膜细胞内有呈颗粒状、条状和环形深棕色表达,室管膜细胞呈单层排列,高倍镜下可见室管膜下散在絮状或丝状阳性表达。实验组阳性细胞内有絮状、丝状深棕色表达的突起明显增多,伸长至室管膜下,分布不规律,部分突起起始部可见细胞核,背侧可见颗粒状深棕色阳性表达较为密集。部分入口处室管膜细胞单层排列,细胞核为蓝染,胞浆呈条状和环形深棕色或深褐色密集表达,细胞多呈圆形或椭圆形,着色深。 1.3 BrdU免疫组化染色:对照组未见BrdU阳性细胞表达。实验组外侧隐窝连续切片上,部分切片室管膜下见少量的BrdU阳性细胞表达,阳性表达细胞的细胞核呈椭圆形或卵圆形,染色呈深褐色。 2外侧隐窝免疫荧光染色 2.1 SOX2免疫荧光染色:对照组腹侧室管膜上皮细胞可见单层SOX2阳性表达细胞,散在分布;室管膜下可见散在分布的SOX2阳性细胞。背侧室管膜及室管膜下偶见阳性细胞,细胞较小。实验组腹侧室管膜上皮及室管膜下SOX2阳性表达细胞较对照组明显密集,呈圆形、椭圆形;背侧区可见SOX2阳性细胞散在表达。 2.2 Nestin免疫荧光染色:对照组在腹侧与背侧室管膜均呈条带状Nestin阳性密集表达,其中,背侧室管膜阳性表达较腹侧稍弱且呈较宽带状,室管膜下未见明显阳性表达。实验组Nestin阳性表达在腹侧区外侧段室管膜呈强阳性,大部分为呈细丝状、条带状,高倍镜下可见胞突Nestin阳性表达,尖端深入室管膜下。背侧室管膜阳性表达仍较腹侧弱,室管膜下偶见Nestin阳性表达细胞。 2.3 SOX2、Nestin荧光双标染色:对照组可见SOX2和Nestin双表达细胞;Nestin阳性细胞在室管膜呈绿色条带状、丝状表达,其间可见散在分布的SOX2阳性细胞胞核呈红色。实验组室管膜和室管膜下均可以看到SOX2和Nestin双表达细胞。 结论: 1外侧隐窝可见SOX2阳性细胞,实验组阳性细胞较对照组表达更为明显,细胞排列密集,脉络丛根部SOX2阳性细胞呈团状密集表达。 2外侧隐窝可见Nestin阳性细胞,实验组可见伸长突起Nestin阳性表达,深入室管膜下。阳性细胞较对照组表达更为明显。 3外侧隐窝可见散在分布的SOX2及Nestin免疫荧光双标细胞,实验组较对照组多。 4实验组外侧隐窝可见散在分布的BrdU阳性标记细胞。