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目的:利用近红外荧光分子cy5.5和Rhodimine与Gd分子偶联bCD—PLL构建而成双功能分子影像探针,对兔血源性内皮祖细胞(EPCs)进行体外标记,探讨双·功能分子影像探针标记EPCs的可行性,并进行细胞群的MR成像和荧光成像。
方法:分离兔外周血单个核细胞贴壁法筛选出EPCs,传代培养,标记bCD—PLL,24h后荧光显微镜观察标记结果；采用四氮噻哗蓝(MTT)比色实验评价不同浓度bCD—PLL标记EPCs后对细胞生长的影响以了解其细胞毒性；在激光共聚焦显微镜下观察EPCs对探针的胞吞效率和探针的双荧光性;流式细胞仪分析检测不同时间点标记,未标记细胞荧光标记率和细胞周期及细胞凋亡情况；用近红外荧光光学成像仪对106细胞团进行荧光成像；应用7T MR进行106个细胞群的T1WI成像并计算T1值。
结果:荧光显微镜观察bCD—PLL作为标记探针将说明标记兔外周血内皮祖细胞成功,可观察到发红色荧光的细胞；MTT比色试验示bCD—PLL标记0,0.25,0.5,1,2,3uM六个浓度梯度组,bCD—PLL标记后的细胞光吸收值与未标记的比较无显著性差异(P＞0.05),对内皮祖细胞的增殖生长活性未见明显影响；流式细胞仪检测分析显示2uM bCD—PLL标记细胞在15min、30min、1h、4h、24h、48h细胞荧光标记率与时间呈正相关关系增高,此浓度孵育20—24小时即可有效标记细胞,标记细胞的细胞周期与未标记细胞相似:激光共聚焦显微镜显示此浓度标记细胞标记率几乎达100％,探针位于细胞质内,且在530nm、640nm两个不同激发光下均有荧光性；2uM bCD—PLL标记的EPCs细胞群荧光信号明显高于ECV304细胞株细胞群；高场7T磁共振成像显示标记细胞群信号强度变化较未标记细胞群信号增强。
结论:0.25uM到3uM浓度的bCD—PLL能有效标记兔外周血EPCs细胞,其对细胞的活力无明显影响。近红外光学成像和7T MR可在体外进行标记细胞群成像,间接反映干细胞的数量和分裂增殖状态。EPCs胞吞效率优于ECV304。