重组人锰超氧化物歧化酶的发酵、分离纯化、性质研究、及其与辐射损伤、肿瘤的相关性研究

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人锰超氧化物歧化酶(rMn-SOD)是一种催化超氧阴离子发生歧化反应的抗氧化酶,其基因定位于人体第6号染色体长臂2区5带(6q25).Mn-SOD的基因表达量具有伴随细胞癌变的过程呈正相关下降的普遍现象,因此有人提出Mn-SOD是潜在的新型肿瘤抑制基因.但是Mn-SOD在人体内含量极少,而且分离纯化方法复杂,限制Mn-SOD的实用性.因此,为了克服Mn-SOD在临床应用上的缺陷,该实验利用生物技术制备了重组rMn-SOD,并对其进行发酵,分离纯化及性质研究,并对其与肿瘤的相关性进行了初步研究.利用基因工程技术,克隆了rMn-SOD cDNA,测定了全序列,并在大肠杆菌系统中进行了高效表达,表达量达到50﹪,表达产物具有SOD活性.用正交实验法和逐步优化法遥瓶培养rhMn-SOD工程菌,得到了较为适宜的培养条件:培养基初始pH6.5,接种量5﹪,37℃培养,5h后加入1mMIPTG或80mM乳糖诱导,同时加入2.4M的Mn<2+>进行激活,诱导后继续培养8h(摇床转速为200rpm).在摇床培养条件的基础上,用5L发酵罐进行发酵培养,采用调节pH和中间补料的方法,rhMn-SOD的酶活力为1456u/ml发酵液,比活力为850u/mg.Pr.用纯化后的rhMn-SOD注射小鼠后进行钴照射,可以显著提高小鼠对辐射损伤的防护能力.培养小鼠胶质细胞瘤、子宫颈癌和正常的人肝细胞株系,在培养过程中加入纯化的rhMn-SOD,结果表明rhMn-SOD对肿瘤细胞有明显的生长抑制作用,但是对正常的肝细胞没有损伤.
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