核苷(酸)类似物治疗获得HBV-DNA<1000 IU/ml、HBeAg消失、HBsAg<3000 IU/ml的慢性乙型病毒性肝炎患者获得性细胞免疫的研究

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目的通过检测慢性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者外周不同亚型CD4+、CD8+T细胞频数及其表面分子,探讨核苷(酸)类似物(nucleot(s)ide analogue,NA)治疗获得HBV-DNA<1000 IU/ml、HBeAg消失、HBsAg<3000 IU/ml的慢性乙型病毒性肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者获得性细胞免疫功能重建情况;同时与病毒学指标相同的低复制期患者相比是否存在差异;并探讨慢乙肝治疗组患者获得性细胞免疫与HBsAg滴度的关系。方法l4例CHB活动期患者:HBV-DNA>2000 IU/ml,HBsAg阳性>6个月,血清转氨酶异常,且ALT>2倍正常值;30例接受NA治疗的CHB患者:0.05 IU/ml<HBsAg<3000 IU/ml,HBV-DNA<1000 IU/ml或低于检出限,HBeAg阴性;20例低复制期CHB患者:0.05 IU/ml<HBsAg<3000 IU/ml,HBV-DNA<1000 IU/ml或低于检出限,HBeAg阴性;13位健康志愿者。采集患者及健康志愿者外周血,用流式细胞技术检测各组外周血中CD4+/CD8+初始T细胞(TN)、中枢记忆性T细胞(TCM)、效应记忆性T细胞(TEM)、效应T细胞(TE),辅助性T细胞1(TH1)、辅助性T细胞2(TH2)、辅助性T细胞(TH17)、调节性T细胞(Treg)频数,并检测CD4+、CD8+T细胞表面分子Tim3、PD1、CTLA4的表达水平。结果(1)与健康对照组相比,慢乙肝治疗组患者CD4+TCM细胞频数升高,而CD4+TE细胞降低。CD8+T细胞各亚型频数在各组间无明显区别。(2)TH1、TH2细胞频数在各组间无明显区别,慢乙肝治疗组TH17细胞频数低于慢乙肝活动组,高于健康对照组,与低复制组无明显区别。慢乙肝治疗组CD4+CD25+CD127dimTreg细胞频数介于慢乙肝活动组与健康对照组之间,与低复制期组无明显区别。慢乙肝治疗组CD25hiTreg细胞CCR4表达高于健康对照组,与慢乙肝活动组、低复制期组之间无明显区别。(3)TH1/TH2比率在各组间无明显区别;Treg/TH17比率慢乙肝治疗组、慢乙肝活动组低于健康对照组,慢乙肝治疗组与低复制期组之间无明显差异。(4)慢乙肝治疗组CD4+/CD8+T细胞上PD-1表达在各组间无明显差异;慢乙肝治疗组CD4+/CD8+T细胞上CTLA4表达与慢乙肝活动组无明显区别,但明显高于健康对照组,稍高于低复制期组。慢乙肝治疗组CD4+T细胞Tim3表达高于低复制期组。(5)慢乙肝治疗组患者血清HBsAg滴度与CD4+CD25+Treg细胞频数呈正相关,与CD4+/CD8+T细胞上的Tim3表达呈正相关,与CD8+T细胞上的PD-1表达呈负相关。结论慢乙肝患者NA治疗后获得性细胞免疫功能并未发生明显变化;慢乙肝治疗组总的CD4+、CD8+T细胞功能低于低复制期组;慢乙肝治疗组患者血清HBsAg滴度水平与Treg细胞频数、T细胞上抑制性分子相关。慢乙肝患者NA治疗获得HBV-DNA<1000 IU/ml、HBeAg消失、HBsAg<3000 IU/ml后,并不能使获得性细胞免疫功能恢复。
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