大豆FKF1和GI基因克隆、表达模式及功能分析

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FKF1和GI在拟南芥光周期开花途径中起促进作用,而且主要是通过FKF1-GI-CDF1---CO-FT这条途径实现的。另外,FKF1和GI还能够通过其他途径来调节FT的表达。大豆是典型的短日照作物,其对光周期的敏感性严重限制了优良品种的种植面积。因此,研究大豆的开花调控途径对于扩大大豆的种植生态区和提高产量至关重要。本研究利用同源克隆的方法获得了大豆的FKF1和GI基因,经蛋白序列比对,相似性分析和进化树分析,进一步确定大豆中存在两个FKF1拷贝,3个GI拷贝,分别命名为GmFKF1和GmFKF2以及GmGI1α、GmGI1β、GmGI2和GmGI3。GmGI1α和GmGI1β是同一个基因的两种剪切方式。拟南芥原生质体的亚细胞定位发现大豆FKF1和GI都主要定位在细胞核里,说明FKF1和GI的亚细胞定位模式在不同物种间具有保守性。GmFKF1、GmFKF2和GmGI2具有几乎完全相同的组织器官和发育时期的表达模式,其表达水平受短日照诱导。GmGI1和GmGI3的组织器官的表达模式类似于GmGI2,但是GmGI1、GmGI2和GmGI3的发育时期的表达具有日长特异性。大豆FKF1和GI在开花期的第二复叶表达量最高,在长日下的花器官和短日下的根中表达量也较高。因此,大豆FKF1和GI可能在相同的组织器官和发育时期发挥作用,而且功能器官或许因光周期条件而异。GmFKF1、GmFKF2和GmGI2在不同日长条件下的节律表达模式基本相同,其昼夜节律表达主要受生物钟的调控,同时也受光的调节。GmGI1和GmGI3的节律表达模式各异,节律性较差,振荡循环周期不稳定。因此, GmGI1和GmGI3的昼夜节律表达主要受光的调控,同时也受生物钟调节。大豆FKF1和GI的振荡节律表达模式不会因光周期的突然转变而紊乱。在酵母中,大豆FKF1能够与GmGI1、GmGI2和GmCDF2相互作用,GmGI1和GmGI2能够与GmCDF2相互作用,而且这些相互作用不依赖于光照。GmGI3的全长不能和GmFKFs和GmCDF2相互作用,但是GmGI3的N端与GmFKFs和GmCDF2有很强的相互作用。GmFKFs、GmGI2和GmGI3的N端是主要的互作功能域,介导同一类基因之间或两类基因之间的互作。GmGI1的N端主要介导同一类基因之间的互作。GmFKF1和GmFKF2的全长不能同源或异源二聚化,但是GmFKF1和GmFKF2的N端之间能够相互作用。大豆GI的3个拷贝之间能够相互作用。因此,大豆FKF1、GI和CDF2之间的互作方式既有保守性又有物种特异性。GmFKF1过表达植株在长日下表现为晚花,而GmFKF2在长日下的开花表型不明显。在短日下各有50%以上的转化株表现为极早花。共同过表达GmFKF1和GmFKF2的转化株的分支数显著多于野生型。GmGI1可能主要影响植物的营养生长,其对开花的作用不明显。因此,FKF1和GI在大豆中的功能可能具有特异性。
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