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第一部分“疑似沙眼”患者CT检测与基因分型研究目的:检测“疑似沙眼”患者结膜拭子,对CT阳性者通过DNA测序、BLAST及进化树分析进行基因分型,分析omp1基因的多态性。初步了解“疑似沙眼”患者沙眼确诊率及CT基因型分布,为临床诊治及疫苗研制提供依据。方法:对重庆市梁平县七桥初级中学的在校478名初中生进行筛查,收集符合临床诊断“疑似沙眼”学生的结膜拭子作为研究对象,使用免疫层析法检测。设计特异性引物,PCR扩增MOMP约282bp的基因片段,产物纯化后进行DNA测序,对测得序列进行BLAST分析,确定CT基因型并构建进化树,分析临床株与GENEBANK中参考株之间的亲缘关系。同时在重庆医科大学附属第一医院妇科门诊收集生殖道衣原体感染患者宫颈管拭子,经免疫层析法+PCR法检测确诊CT阳性标本作为阳性对照。结果:478名初中生中,64例符合“疑似沙眼”临床诊断。免疫层析法检测CT获阳性0例,PCR法检测CT获阳性0例。由于无CT阳性样本,未进行DNA测序与序列分析。结论:CT已不是“疑似沙眼”患者主要病原菌,应考虑其他病原或非感染因素所致。做“疑似沙眼”这一诊断时应非常谨慎,有必要开展大规模的流行病学调查,明确真正病原。第二部分“疑似沙眼”患者结膜感染常见病原检测与基因分型研究目的:选择眼部感染常见病原细菌、HSV和HadV为目的病原,检测“疑似沙眼”患者结膜拭子,对病原阳性者通过DNA测序、BLAST及进化树分析,确定细菌菌属和病毒基因型。初步了解“疑似沙眼”患者病原学情况,为临床诊治提供依据。方法:分别设计细菌通用引物、HSV和HadV特异性引物,对上述64份结膜拭子进行检测,PCR扩增阳性产物纯化后进行DNA测序,对测得序列进行BLAST分析,确定细菌菌属和病毒基因型并构建进化树,分析临床株与GENEBANK中参考株之间的亲缘关系。结果:64例“疑似沙眼”患者结膜拭子标本经PCR扩增,9例标本扩增出约152bp的目的片段,10例标本扩增出约287bp的目的片段,与预期可能出现的目的片段大小相符,其中4例为两种长度片段均阳性。经DNA测序、BLAST分析,发现9株细菌均属肠道细菌,核苷酸进化树显示与沙门氏菌亲缘关系最近;10株HadV均属5型HadV。且测得序列的细菌之间、HadV之间亲缘关系极近。结论:“疑似沙眼”患者感染性致病病原中包括类似沙门氏菌的肠道细菌与5型HadV;“疑似沙眼”病原可能与居民生活地的卫生条件、环境、居民生活习惯有关。