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刺参(Stichopus japonicas)是我国北方唯一的食用海参,渤海湾至江苏连云港的周边海域为其主要分布地带。近年来的研究发现,刺参多糖具有广泛的生物活性,包括抗凝血、抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力等,但有关刺参多糖及其复合物对神经系统疾病的作用仍少见报道。本实验从鲜刺参中用现代工艺提取分离得到刺参岩藻多糖,研究其对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并对其作用机理进行了初步的研究。论文的主要内容如下：1.刺参岩藻多糖的提取和分离纯化。在实验室前期研究基础上,采用双酶解之后加醇沉的方法提取得到刺参粗提物,大孔吸附树脂柱进行脱色,纯化过程用DEAE-Sephrose柱进行首次分离,紫外210nm、280nm结合苯酚硫酸法监测各流出组分,得到4个峰,对其有活性的3号峰进行收集,命名为SJP-3,后用Superdex200对其进行第二次分离纯化,得到SJP-3A、SJP-3B两个峰,G-25柱脱盐,对脱盐组分进行冷冻干燥,选用活性较好的SJP-3A(SJP-3)进行后续的研究。对SJP-3进行理化性质分析,表明SJP-3为均一组分,其分子量为179000Dal；硫酸钡比浊法测得其硫酸根含量为29.75%；苯酚硫酸法测得其糖含量为57.18%。2.刺参岩藻多糖对PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究。我们首先研究了SJP-3对PC12细胞形态学及活力的影响,发现SJP-3浓度低于500μg/mL时对细胞基本无毒性作用。采用10mmol/L Na2S2O4对PC12细胞进行缺氧损伤2h,随后复氧培养24h,构建缺氧/复氧损伤模型,研究SJP-3对它的保护作用。实验表明,100、300、500μg/mL的SJP-3可有效改善缺氧/复氧诱导的细胞形态学改变,提高细胞存活率,减少LDH渗漏,降低MDA值,提高SOD活力,Hoechst33342荧光染色以及Annexin/PI双染的流式检测结果表明,缺氧/复氧损伤引起了PC12细胞的凋亡,加入SJP-3进行保护可减轻细胞凋亡。3.刺参岩藻多糖抗缺氧/复氧损伤作用的初步机制研究。流式细胞仪检测各组(正常组、模型组、各剂量SJP-3保护组)线粒体膜电位,western blot检测相关蛋白表达以研究SJP-3抗缺氧/复氧损伤的保护机理。线粒体膜电位检测表明,损伤模型组线粒体膜电位降低,Bax/Bcl-2比值升高,裂解的caspase-3、 caspase-9等蛋白表达增加,预先加入SJP-3进行保护可稳定线粒体膜电位,降低Bax/Bcl-2比值,caspase-3、caspase-9表达减少。以上结果提示,SJP-3抗PC12细胞缺氧/复氧损伤的保护作用与稳定线粒体膜电位,抵抗线粒体/Cyt-C途径的凋亡有关。本实验以PC12细胞建模,对SJP-3抗神经细胞缺氧/复氧损伤的作用进行了研究,并对其作用机理进行了探讨。通过实验初步确定了SJP-3抗神经细胞缺氧/复氧损伤的作用机制,为临床防治脑缺血/再灌注引起的神经细胞损伤提供了潜在的理论依据和可能的药物来源,为海洋生物多糖的高值化利用提供了思路。