研究背景双酚A是合成聚碳酸酯、环氧树脂的高分子材料,被广泛应用于包装材料、牙科固封剂、奶瓶等日常用品。根据美国卫生部调查显示,有95%的人群持续暴露于双酚A,在其血液、尿液、羊水中均检测到双酚A。近年来的研究发现,双酚A是一类环境内分泌干扰物,具有拟雌激素效应,可与雌激素受体结合,干扰机体神经、免疫、生殖、内分泌系统,产生可逆或不可逆的生物学效应。因此,受到研究者的广泛关注。但其对机体影响的具体调控机制尚不清楚。研究目的利用雌激素受体特异性拮抗剂、激动剂和不同的乳腺癌细胞模型,深入探讨双酚A通过GPR30诱导乳腺癌细胞增殖的信号转导通路调控机制。研究方法利用ERα、ERβ、GPR30特异性拮抗剂（ICI182780、G15）,激动剂（PPT、DPN、G1）和不同的乳腺癌细胞模型（雌激素受体阳性的MCF7细胞、仅表达GPR30的SKBR3细胞）交叉对比雌激素受体在双酚A诱导乳腺癌细胞增殖中的作用。CCK-8细胞计数试剂盒检测不同浓度的双酚A（10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M）作用不同时间（12h、24h、48h、96h）对乳腺癌细胞活力的影响。划痕实验、Transwell迁移实验观察双酚A对乳腺癌细胞迁移的变化。流式细胞仪检测双酚A对乳腺癌细胞周期的影响。RT-PCR和Western blot技术观察双酚A对乳腺癌细胞GPR30和c-fos的m RNA和蛋白水平表达的影响。Western blot技术检测双酚A对ERK、Akt、PKA信号通路的作用。AG-1478、PD98059、LY294002、MK2206、H89抑制EGFR、ERK、PI3K、Akt、PKA来探讨GPR30介导EGFR-ERK、PI3K-Akt、PKA信号通路在双酚A诱导乳腺癌细胞增殖中的作用。研究结果1.10^-7M、10^-8M、10^-9M、10^-10M、10^-11M的双酚A孵育人乳腺癌MCF7细胞和SKBR3细胞后12小时后,可上调细胞活力,剂量-效应曲线呈倒U型。10-9M、10-12M的双酚A与细胞预孵不同时间（12、24、48、96小时）,MCF7和SKBR3细胞活力增加。细胞增殖效应不随双酚A作用时间的延长而增加。2.划痕实验和Transwell迁移实验显示,10^-9M的双酚A作用MCF7和SKBR3细胞后,可促进细胞的迁移。3.双酚A可上调乳腺癌SKBR3细胞GPR30和c-fos的m RNA和蛋白水平表达,其作用可被G15抑制。4.ERs拮抗剂ICI182780不能抑制双酚A诱导MCF7细胞的增殖。ERs激动剂对双酚A诱导MCF7细胞的增殖影响不明显。GPR30特异性抑制剂G15可抑制双酚A诱导MCF7或SKBR3细胞的增殖。反之,GPR30特异性激动剂G1则可促进双酚A诱导MCF7或SKBR3细胞的增殖。5.双酚A可快速激活ERK、Akt信号通路,使ERK、Akt呈高磷酸化。但对PKA信号通路没有影响。6.GPR30、EGFR、ERK、PI3K、Akt拮抗剂可降低双酚A诱导的SKBR3细胞增殖。7.阻断GPR30、EGFR、PI3K后,双酚A诱导ERK和Akt信号通路磷酸化程度降低。研究结论GPR30-EGFR-ERK和GPR30-PI3K-Akt信号转导通路参与调控双酚A诱导乳腺癌细胞增殖。