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[背景与目的]趋化因子是一类能够引起白细胞直接迁移的细胞因子,趋化因子及其受体之间形成一种复杂的趋化因子网络,影响肿瘤细胞的生长、存活、迁移、血管形成以及肿瘤部位的白细胞浸润。CXCR4是最常见的一种高表达于不同类型恶性肿瘤细胞上的趋化因子受体。CXCR4与其配体CXCL12(又名SDF-1)结合,构成SDF-1/CXCR4生物学轴,广泛参与肿瘤的趋向性侵袭、转移及预后。神经母细胞瘤是儿童最常见的颅外恶性实体瘤,其恶性程度高,可发生早期多处转移,研究提示趋化因子受体CXCR4在神经母细胞瘤细胞表面的表达异常是导致肿瘤转移浸润的重要因素。除了趋化因子受体的异常表达外,肿瘤细胞对体内免疫监视系统的逃逸也是其发生、发展及转移的重要机制之一。众多研究表明,Foxp3,一种抑制机体免疫应答的转录因子,广泛参与了肿瘤细胞的免疫逃避过程。深入探讨Foxp3在肿瘤组织中的表达及其意义也是本领域研究的热点之一。基于以上资料,为了深入认识神经母细胞瘤的生物学规律,本研究以LA-N-5及SK-N-SH细胞为研究对象,探讨CXCR4及Foxp3在上述两种神经母细胞瘤细胞中的表达及其化疗药物CTX,THP对其的影响,明确化疗药物是否能通过抑制转移相关趋化因子受体,或通过抑制Foxp3的表达发挥作用。[材料与方法]体外培养神经母细胞瘤细胞系LA-N-5及SK-N-SH;常规流式细胞术(FACS)方法测定CXCR4在上述两种细胞中的表达;用细胞内染色的方法检测Foxp3在上述两种细胞中的表达;MTT试验明确化疗药物CTX,THP对两种细胞的效应剂量;最后通过实时定量PCR方法(Real-time PCR),在基因水平检测化疗药物对上述肿瘤细胞中CXCR4及肿瘤耐受相关分子Foxp3表达的变化。[结果]1.FACS结果显示LA-N-5及SK-N-SH两种神经母细胞瘤细胞均高表达CXCR4分子(图1)。2.FACS结果显示,化疗药物CTX,THP显著降低了LA-N-5细胞上CXCR4的表达,加药组细胞CXCR4的平均荧光强度显著低于未加药对照组(p<0.05)(图3A)。而化疗药物CTX,THP以及二者联合的情况下,均未显著影响神经母细胞瘤SK-N-SH上CXCR4的表达(p>0.05)(图3B)。3.Real-time PCR结果显示化疗药物CTX本身未表现出降低CXCR4表达的效果,而THP或THP与CTX合用的情况下显著降低了LA-N-5细胞中CXCR4的表达,(P<0.01)。4.FACS结果显示LA-N-5,SK-N-SH两种神经母细胞瘤内均高表达Foxp3分子(图2-1)。5.化疗药物CTX,THP显著降低了LA-N-5上Foxp3分子的平均荧光强度(P<0.05),而上述化疗药物对SK-N-SH细胞内Foxp3分子的荧光强度没有显著的影响(图2-2)。6.Real-time PCR结果显示CTX显著降低了Foxp3在LA-N-5细胞中的表达(P<0.05),而其他加药组与对照组未出现显著的差异(图2-3)。[结论]化疗药物CTX,THP能分别在蛋白或基因水平降低转移相关趋化因子受体CXCR4,以及肿瘤逃逸相关转录因子Foxp3在神经母细胞瘤细胞的表达,提示化疗药物可能通过影响上述分子的表达发挥作用。