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神经胶质瘤（glioma）是起源于神经外胚层的恶性肿瘤。脑胶质瘤占所有原发性脑肿瘤的32%，其中80%为恶性胶质瘤。一般将神经胶质瘤分为四个级别：Ⅰ级﹑Ⅱ级﹑Ⅲ级与Ⅳ级，随着级别的上升胶质瘤的恶性程度增加。由于目前还不能完全了解胶质瘤的发病机制与发病原因，所以无法从根本上抑制胶质瘤的发生与发展。同时胶质瘤具有向周边正常组织迁移及侵袭的能力，而且胶质瘤患者复发的几率很大，因此目前的医疗技术只能使神经胶质瘤患者短暂地延长存活时间而无法达到根治的效果。即使早期手术﹑药物及化疗有一定的疗效，但患者治疗后的平均生存期也仅为14个月。如何发现胶质瘤高效特异的诊断、治疗和监测靶点并且防止胶质瘤复发成为其治疗的重要环节。MicroRNAs（miRNAs）发现于20世纪90年代，是一类大约含有22个核苷酸的非编码小RNA分子。虽然发现的时间不长，但已成为目前医学界研究的明星分子。miRNAs参与很多肿瘤的发生与发展，在神经胶质瘤中miRNAs也起到很重要的调控作用，提示miRNAs对于神经胶质瘤的诊断和治疗可能具有较好的应用前景。但哪些miRNAs分子在神经胶质瘤的发生发展中发挥关键作用？其调控机制如何？目前还不完全清楚。Notch信号途径具有在进化上高度保守的特性，其相关分子在非脊椎动物﹑脊椎动物中都有不同程度的表达。许多研究已经证实Notch信号在神经胶质瘤的发生﹑发展﹑侵袭以及血管的生成中起着重要的调节作用。同时也有研究指出多种miRNAs分子参与Notch信号途径。但是Notch信号与miRNA的具体关系及其意义，目前仍缺少相关报道。本研究室在前期研究中在不同系统对Notch信号的下游miRNA分子进行了筛选，鉴定出一批潜在的Notch下游分子，并对其作用进行了初步研究。本实验结合文献复习，采用细胞培养、miRNA转染、报告基因实验、细胞生物学观察、结合部分临床标本的研究，对的三种miRNA分子的作用特性及在胶质瘤中的潜在作用进行了初步研究。主要发现如下：1.初步观察了Notch信号潜在下游miRNA（miR-342-5p）对几种下游分子的直接调控作用。构建了miR-342-5p的潜在下游分子ph2, ph3, Araf, PFN2和GAS2的报告基因载体；利用报告基因实验检测了miR-342-5p对上述报告基因表达的影响，结果发现这些基因的3’-UTR并不受miR-342-5p的直接调控，提示miR-342-5p存在其他的靶基因，或者其调控作用不通过3’-UTR发挥。2.初步观察了miR-9对胶质瘤细胞的影响。采用细胞培养、转染、细胞生物学观察等方法初步探讨了miR-9对胶质瘤细胞的影响。初步结果显示miR-9可以调控神经胶质瘤细胞突起的生长，但对细胞的迁移似乎没有明显的影响。3．初步探讨了miR-188-5p对胶质瘤细胞的作用。利用培养的胶质瘤细胞系和合成的miR-188-5p的mimics和inhibitor，观察了miR-188-5p对胶质瘤细胞的迁移有影响。通过划痕实验证实miR-188-5p可以抑制胶质瘤细胞的迁移。进一步通过transwell实验证实miR-188-5p可以抑制胶质瘤细胞的侵袭。此外，还检测了miR-188-5p是否对细胞的增殖有影响，即通过免疫荧光实验染色胶质瘤细胞的增殖相关抗原的表达，证实miR-188-5p对细胞的增殖并无影响。进一步探讨了miR-188-5p是通过什么机制来抑制胶质瘤细胞迁移与侵袭的。鉴于MMPS家族分子，尤其是MMP2对细胞的迁移与侵袭的重要影响，在前期本科室的研究发现MMP2、MMP13是miR-188-5p的靶基因的基础上，观察了多种胶质瘤细胞系中MMPS分子的表达。通过WB实验证实在所检测的几种胶质瘤细胞系中都有miR-188-5p与MMPs分子的表达，并且初步证实miR-188-5p可以抑制MMPs分子的表达。在上述工作的基础上进行了一定程度的体内观察。分别提取胶质瘤肿瘤组织与瘤旁正常组织的蛋白与RNA。首先通过qRT-PCR实验证实在肿瘤组织中miR-188-5p的表达量低于正常组织；其次通过WB实验证实在肿瘤组织中MMPs的表达量高于正常组织。这与细胞水平验证的结果完全一致。此外，在前期工作和文献已经报道Notch信号途径的相关分子在胶质瘤的发生与发展中起着很重要调控作用的基础上，检测了肿瘤组织中Notch信号途径相关分子的表达。通过WB实验证实在肿瘤组织中Notch下游分子Hes1、Hes5的表达量高于正常组织。结论：通过本课题研究，成功构建了miR-342-5p的潜在下游分子ph2, ph3,Araf, PFN2和GAS2的报告基因载体，发现这些基因的3’-UTR并不受miR-342-5p的直接调控；发现miR-9可以调控神经胶质瘤细胞突起的生长，但对细胞的迁移似乎没有明显的影响；发现miR-188-5p可以抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭，而对细胞的增殖无显著影响；初步证实MMPs是miR-188-5p的下游靶分子，可能参与了Notch信号途径对胶质瘤细胞的调控作用。这些结果对于认识Notch信号途径以及miRNA在胶质瘤细胞中的作用和作用机制，具有重要意义。