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黄姑鱼(Nibea albiflora)是我国沿海重要的经济养殖鱼类,具有性成熟周期短、养殖技术成熟等优点,可以作为鱼类生殖细胞移植的受体。在鱼类生殖细胞移植中,由于受体内源的生殖细胞与供体生殖细胞存在竞争,不育受体的制备至关重要。为了制备不育受体,本研究系统分析了白消安和高温处理对黄姑鱼生长、性腺发育、生殖细胞和体细胞基因表达等影响。本研究设计不同剂量白消安(10 mg/kg、40 mg/kg)及高温(30℃)处理黄姑鱼,实验分为5组:对照组;白消安10 mg/kg组(Bu10组);白消安40 mg/kg组(Bu40组);白消安10 mg/kg高温处理组(Bu10H组);白消安40 mg/kg高温处理组,(Bu40H组)。白消安以不同剂量在第0和14天进行两次的腹腔注射。主要研究结果如下:1.首先发现白消安和高温处理对各组雌雄黄姑鱼的生长性能没有显著影响,但对性腺发育的影响具有明显的性别差异:各组雄鱼的性腺重和性腺成熟指数(GSI)较对照组显著降低(P<0.05),但各组雌鱼的性腺重和GSI没有显著差异(P<0.05)。并且,Bu10组和Bu40组基本没有死亡,而Bu10H组和Bu40H组的存活率较低,表明高温-白消安联合处理对黄姑鱼的存活率有较大影响。2.在实验过程的第14天、28天、38天、48天进行取样,通过组织学分析白消安和白消安-高温联合处理对性腺发育过程的影响。结果发现:雄鱼在白消安注射后第14天出现生殖细胞凋亡,精巢内出现空腔,且高浓度处理组(Bu40组)较低浓度处理组的消除生殖细胞的效果明显,表现一定的浓度效应;白消安-高温的联合处理对雄鱼的生殖细胞并没有表现出累积效果;雌鱼卵巢并未受白消安和高温处理的影响,再次证明白消安处理对黄姑鱼生殖细胞的影响具有性别差异。3.进一步采用荧光定量PCR和原位杂交分析了生殖细胞(vasa)和体细胞标记基因(雄:dmrt1;雌cyp19a)表达的影响,荧光定量结果显示雄性黄姑鱼在白消安注射后第14天、第28天时,性腺内vasa基因表达与对照组相比受到明显抑制,且处理浓度越大受抑制程度越高,而高温会增强抑制效果,但差异并不显著;在处理第38天(恢复10天)、第48天(恢复20天)时,各组雄鱼性腺内的vasa基因表达与对照组相比仍明显被抑制。而各组雌鱼的vasa基因表达与对照组相比则无显著差异。雄鱼性腺内dmrt1基因和雌鱼cyp19a基因表达与对照组相比无显著变化。对vasa进行原位杂交分析,结果显示vasa基因主要在生殖细胞表达,对照组雄鱼vasa基因表达正常,主要在精子、精母细胞内表达,而Bu10、Bu40组、Bu40H组的信号较弱,进一步证明白消安处理导致生殖细胞凋亡。而各组雌鱼vasa基因表达正常,主要表达于卵母细胞的细胞质内。对cyp19a基因进行原位杂交分析,发现对照组和各处理组均有cyp19a基因信号存在,且信号存在于生殖细胞及周围的体细胞内。综上,白消安处理造成黄姑鱼雄鱼精巢内生殖细胞凋亡,其生殖细胞基因表达受到抑制,但对雌鱼生殖细胞及其相关基因则无显著影响。对于雌雄鱼而言,白消安处理不会影响其体细胞相关基因表达。高温处理会强化白消安对生殖细胞的消除效果,但容易造成较高的死亡率而不宜在实际生产使用。通过上述实验结果的优化,本研究认为采用40 mg/kg浓度两次间隔注射白消安能够制备不育黄姑鱼。