药物对维持人类的健康做出了越来越显著的贡献,但是药物杂质却给人类带来诸多副作用,传统的有关物质分析方法已经不能满足需要,HPLC-QTOF-MS联用技术,集HPLC的高效分离和Q-TOF-MS的高灵敏度、高专属性、高分辨率于一体的一种联用技术,在定性、定量分析方面具有明显的优势,较好地适应了现代药物研究对自动化、高通量分析方法的需求,已成为药物杂质结构研究这一现代药学前沿领域中最强有力的分析工具之一。本文就是通过HPLC-QTOF-MS联用技术建立了对头孢拉定原料药和抗癌药盐酸吉西他滨中的主要杂质进行结构鉴定和裂解途经分析,并推测其可能来源,为药物生产工艺改进和监管提供理论依据。首先,建立了适用于分析头孢拉定质谱分析的色谱条件,优化得到适当的质谱条件,筛选所需要的碎片信息来准确鉴定杂质X的结构。杂质X鉴定为4,5双氢头孢拉定,Y杂质群中1、3为对、邻位头孢羟氨苄,2、4、5为头孢拉定羟基化结构,6为头孢拉定羰基化结构。从生产工艺推测杂质X来源于起始原料双氢苯甘氨酸中含有的四氢苯甘氨酸参与合成,故建立了HPLC-QTOF-MS方法鉴定双氢苯甘氨酸中的主要杂质,结果证实为四氢苯甘氨酸。其次,通过HPLC-QTOF-MS手段对抗肿瘤药物盐酸吉西他滨中的一个主要杂质进行结构鉴定,鉴定该杂质为2’-脱氧-2’,2’-二氟尿苷,给出了其可能的裂解途径,高分辨数据偏差均小于25ppm,再对NMR和UV数据进行分析,确证了该杂质的结构。通过制备液相手段获取少量2’-脱氧-2’,2’-二氟尿苷,纯度达99.8%,测得其相对校正因子为0.76,检测限为0.49μg·mL-1。考察了该杂质的可能来源：一、合成过程温度过高使得胞嘧啶脱氨基向尿嘧啶变化参与反应；二、样品重结晶温度过高或者流通过程中受热脱氨基产生。