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目的：蟾毒灵是中国传统中药蟾酥的主要有效成分，具有广谱抗肿瘤作用。然而其水溶性差、毒性大、代谢速度快、治疗窗窄等缺点严重限制了其临床应用。本课题采用新型给药体系脂质体为载体，不仅解决蟾毒灵的难溶性问题，还能起到缓释控释的作用。通过柑橘果胶（CP）包裹蟾毒灵脂质体（BFL），制得果胶-蟾毒灵脂质体（CPL），为肠道黏膜腔道给药提供新思路。另通过耦合anti-CD40单克隆抗体连接上BFL，制得anti-CD40-蟾毒灵脂质体（anti-CD40-BFL），协同化疗和免疫治疗，增强抗肿瘤效果的同时降低了因药物在体内快速分布而引起的全身性副作用。方法：采用高效液相色谱技术（HPLC）建立BFL中蟾毒灵含量的测量方法。通过单因素考察及正交设计优化BFL的最佳工艺。通过正负电荷吸附制备CPL，评价其质量、稳定性、黏附性、细胞吸收情况、体外抗肿瘤作用及机制；并考察CPL及BFL在大鼠体内的药代动力学情况。通过马来酰亚胺-硫醇反应制备anti-CD40-BFL，评价其体内外抗黑色素瘤作用；通过Western blot印迹实验考察凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9及Cyt C表达水平；TUNEL法及苏木精-伊红染色（H&E染色）观察肿瘤细胞的凋亡；ELISA法测量体内细胞因子TNF-α，IL-1β，IL-6，IFN-γ及ALT含量；并通过免疫荧光实验观察其在体内分布情况。结果：用HPLC法测量BFL中蟾毒灵含量，回归方程为A=17865C-2116.7，r=1，蟾毒灵在0.8~40μg/mL浓度范围内线性关系良好，特异性、精密度和回收率均符合测量要求。用乙醇注入法制得脂质体的包封率较高，正交设计最佳处方为：药-脂比为1∶5，卵磷脂-胆固醇的质量比为1∶5，PBS缓冲液体积为10.0mL，将材料完全溶于乙醇后缓慢注入水相中，50℃不断搅拌，持续加热至乙醇全部挥尽，加PBS缓冲液补充体积至10.0mL，用脂质体挤出仪反复挤压通过200nm的膜。制得CPL外观圆整、分散均匀，粒径296.3±77.4nm(PI=0.171)，表面电位18.1±5.33mV，包封率72.31±5.84%；制成冻干粉剂后长期稳定性较好；体外释放时间延长，黏附性增加约3倍；包裹上果胶后不影响细胞吸收情况，同时增强对SW480结肠癌细胞抑制作用；蟾毒灵将SW480结肠癌细胞增殖阻滞于S期。脂质体组较蟾毒灵单体药物组总清除率减小，曲线下面积增大。蟾毒灵、BFL及CPL药代动力学参数CLz/F分别为0.101±0.006、0.049±0.007及0.062±0.02L/min/kg；AUC(0-t)分别为8.718±1.14、16.531±2.842及12.186±1.88mg/L min。制得anti-CD40-BFL粒径为205.4±68.4nm （PI=0.062)，表面电位-15.68mV，包封率为73.59±3.14%，ELISA法测得脂质体上耦合anti-CD40的密度为5mg/mL。CCK-8法测得蟾毒灵、BFL及anti-CD40-BFL体外抗黑色素瘤B16细胞作用IC50分别为224.12±3.14、69.91±0.93、61.73±1.21nmol/mL；生理盐水、anti-CD40溶液、蟾毒灵、BFL及anti-CD40-BFL治疗荷黑色素瘤C57小鼠，最终瘤体积分别为726.354±102.53，477.96±76.89，284.35±84.05，254.53±44.99及176.34±43.86mm3；anti-CD40-BFL组Caspase-3、Caspase-9及细胞色素C表达水平升高，灰度值分别为0.92±0.026，1.58±0.013，1.069±0.016；anti-CD40-BFL组细胞因子含量低于anti-CD40组，且在肿瘤、脾、淋巴结等部位能够更持久的停留。结论：CPL具有较好的稳定性、缓释性、黏附性及抗SW480结肠癌细胞作用，能够有效的减缓蟾毒灵在大鼠体内的代谢速率，增加药物的半衰期及生物利用度，是一种有前景的治疗结肠癌药物；anti-CD40-BFL联合化疗及免疫治疗作用，抗黑色素瘤作用增强，同时由于缓释控释作用，减少系统副作用。