鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus,DTMUV）引起以蛋鸭采食量减少、产蛋量下降,雏鸭伴有神经症状、生长迟缓等为特征的传染病。从2010年开始,鸭坦布苏病毒病在我国主要养鸭地区均有流行,给养鸭业造成了巨大的经济损失。目前临床上可快速有效检测该病的血清学方法不多,本研究拟建立针对鸭坦布苏病毒的ELISA诊断方法,为防控该病提供有效手段。本研究首先通过RT-PCR以及全基因组测序方法对2株DTMUV进行系统鉴定。结果表明,HNSW株为FX2010株分支中的一株,基因组全长为10991 bp,含有1个大的阅读框,编码3425个氨基酸的多聚蛋白,与NCBI公布的FX2010株（登录号MH454168.1）的基因组相似性高达99.52%。LY株的基因组全长为10990 bp,与shandong株（登录号:JX965381.1）相似性高达98.92%,跟shandong株处于同一个分支,亲缘性相对较近。然后对DTMUV的E蛋白进行原核表达与鉴定,E蛋白为DTMUV的主要抗原区域。根据FX2010株结构E蛋白基因序列,设计、合成一段大小为1530 bp的E基因片段并且克隆至p ET-28a（+）表达载体中,经PCR鉴定且测序完成后,确认得到的p ET28a-E载体中含有目的蛋白E。将p ET28a-E转化入大肠杆菌BL21（DE3）中,用1.0 m M IPTG诱导4.0 h后可获得大量目的蛋白,同时利用镍离子亲和层析方法对目的蛋白进行纯化,然后利用SDS-PAGE电泳和Western blot方法对目的蛋白进行鉴定。SDS-PAGE结果显示目的蛋白大小约为55 k Da,与预期一致,表明目的蛋白得到表达,Western blot结果则显示,该E蛋白具有良好的免疫原性。随后,利用表达的DTMUV E蛋白建立间接ELISA检测方法。将上述E蛋白片段作为包被的抗原,以DTMUV的阳性血清作为一抗,建立检测DTMUV抗体的间接ELISA方法,经过对反应条件的优化后,得到最佳的反应条件为:抗原、一抗的稀释度为1﹕400,用1%BSA进行封闭1.0 h,然后一抗血清孵育1.5 h,二抗孵育1.0 h,用TMB显色剂进行显色10 min,最后在酶标仪上用OD620来读取数值。并且确定阴阳性的临界值为0.791,当待测样品的OD620值?0.791则判断为阳性,当OD620值（27）0.791则判断为阴性,且敏感性达到1﹕1600,敏感性较高。将建立的方法对小鹅瘟病毒、禽流感病毒、呼肠孤病毒进行了特异性检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性,不与其他病毒相反应。综上所述,本研究成功的对DMTUV的主要抗原区域E蛋白进行原核表达以及纯化,获得了具有良好抗原性的目的蛋白,并以纯化后的E蛋白作为包被抗原建立了检测DMTUV的间接ELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性。