锥栗(Castanea henryi Rehd.et Wils.)是壳斗科(Fagaceae)栗属(Castanea Mill.)植物,为我国特有。锥栗是一种集食用、材用为一身的经济树种,风味明显优于板栗,又是优良的建筑用材,同时锥栗也是世界栗属植物品种改良的天然基因库。但目前,我国学者还没有对野生锥栗做过系统的资源调查,对我国野生锥栗资源现状、遗传多样性水平及遗传变异格局等方面的研究报道较少。本研究运用ISSR分子标记技术,以锥栗分布区内的16个居群449个野生锥栗个体为研究对象,在物种和居群水平上对锥栗居群遗传多样性及遗传结构进行ISSR分析;同时,还对部分农家品种进行了鉴定和遗传多样性研究。主要试验结果如下:1以锥栗叶片DNA为模板,对影响锥栗ISSR-PCR扩增效果的因素进行筛选和优化,建立了适用于野生锥栗的ISSR-PCR分析体系:25μL反应体系中,10×buffer2.5μL,模板DNA用量40或50ng,Mg2+1.5mmol/L,dNTPs0.2mmol/L,引物0.3μmol/L,Taq DNA聚合酶用量1.0U,最后加无菌水至25μL。PCR扩增程序:94℃预变性3min;然后94℃变性45s,44℃—59℃(根据引物而定)退火45s,72℃2min,32个循环;最后72℃充分延伸5min,4℃终止反应。2从60条ISSR引物中筛选出20条扩增条带较多、信号强、背景清晰的引物用于ISSR-PCR反应;449份野生锥栗试材共扩增出379条DNA谱带,其中多态性带378条,占99.74％;Nei’s基因多样度(即平均期望杂合度He)为0.2950,Shannon信息指数(Ⅰ)为0.4522;居群多态位点百分率在36.94%—53.30%之间,平均为46.09%;Nei’s基因多样度(He)在0.1202—0.1861之间,平均为0.1573;Shannon信息指数(Ⅰ)在0.1817—0.2781之间,平均为0.2357;AMOVA分析表明,居群间变异占47.49%,居群内变异占52.51%。结果表明:(1)供试锥栗具有较高的遗传多样性水平,居群间遗传分化较大,生境隔离和片段化、基因流受阻和遗传漂变可能是造成居群间遗传分化较大的原因;(2)不同居群遗传多样性不同,其中以湘西居群、靖州居群的遗传多样性水平较高,南平、资源居群较低。依据ISSR标记数据,对野生锥栗居群进行UPGMA聚类分析,结果表明,449份单株按各自居群聚在了一起。3利用筛选出的13条引物,对锥栗37个农家品种进行遗传多样性及亲缘关系分析。结果显示:(1)13条引物可区分37份农家品种及其优株;(2)供试农家品种的观测等位基因数1.8269,有效等位基因数1.5097,Nei’s基因多样度(He)为0.2923,Shannon信息指数为0.4344;(3)每条引物的扩增谱带从9条(引物828)—16条(引物821)不等,共扩增出156条谱带,平均每个引物产生12个ISSR片段,其中多态性带129条(占82.69%,每个引物产生9.9条多态性条带)。说明锥栗品种具有丰富的遗传多样性水平。4根据资源调查情况及遗传多样性和遗传变异分析结果,对我国锥栗资源利用和保护提出了三点建议。