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皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)自然分布于我国黄渤海区,是我国北方海区的重要养殖贝类。但至今有关皱纹盘鲍的功能基因研究尚处于起步阶段,在核酸数据库中,注册的皱纹盘鲍核酸序列仅 92 条,其中含功能基因序列 23 条,在这23 条功能基因中,涵盖的基因种类数为 8 种。同时,目前在整个鲍科物种中 EST研究都非常缺乏,鲍的注册 EST 数仅有 26 条,其中来源于耳鲍(Haliotis asinina)的 14 条、九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)的 12 条。 EST 大规模测序技术和基因表达谱芯片技术,具有高通量快速性的特点,可以同时处理分析大量实验样本,在生物功能基因组研究中发挥了巨大的作用,它们已被广泛应用于新基因的克隆、组织特异性基因表达谱分析以及基因组序列的功能注释等许多研究领域。EST 测序分析成为大规模获取功能基因一种最为快捷和有效的研究手段(Delseny et al., 1997; Ablett et al., 2000)。因此,借鉴其它生物成功的经验,通过建立皱纹盘鲍表达基因文库,进行 EST 序列分析,可能在较短时间内获得较多的皱纹盘鲍功能基因表达信息;而表达谱基因芯片可以帮助我们获得与表型相关的差异表达基因。 本文通过文库构建、序列分析、生物信息学分析、表达谱基因芯片的研制和应用等途径,获得如下结果: 1. 选取壳色表型为橘红色的突变品系 RwRh 家系的个体构建了 cDNA 文库。 2. 对 cDNA 文库进行 EST 测序,获得了 4494 个长度大于 150bp、精度大于 90%的 EST 序列。通过 DNAtools 软件对上述 4494 条 EST 进行同一性分析之后,得到了 3205 条无冗余的独立 EST。再用 3205 条无冗余的独立 EST 与核酸数据库和蛋白质数据库分别进行了 BlastN 和 BlastX 序列同源性比对。 在 BlastN 比对结果中,178 条 EST 与已知功能基因的序列有较高同源性;9条 EST 与具假定功能的序列有较高同源性;3 条 EST 与功能尚不明确的基因有较高同源性;还有 10 条 EST 与非功能序列有较高同源性。与已知功能的基因具较高同源性的 178 条 EST 序列可按功能分为 7 类:能量代谢(34 条),细胞结构